imWilms1

Garis sel Wilms1 pada awalnya berasal dari tumor Wilms primer, yang diperoleh dari pasien yang didiagnosis dengan tumor ginjal bilateral besar, suatu presentasi karakteristik tumor Wilms (nefroblastoma). Garis sel ini memiliki mutasi omong kosong homozigot pada gen WT1 (c.149 C>A, p.S50X), yang mengarah pada produksi protein WT1 yang terpotong dan tidak berfungsi. WT1 adalah gen penting dalam perkembangan ginjal, dan mutasinya terkait erat dengan patogenesis tumor Wilms, terutama pada tumor yang menunjukkan diferensiasi stroma. Sel Wilms1 menunjukkan kariotipe yang stabil tanpa kelainan kromosom yang signifikan, dan ditandai dengan fenotipe mesenkim, mengekspresikan vimentin namun tidak memiliki penanda epitel seperti sitokeratin. Garis ini menunjukkan kapasitas diferensiasi mesenkim yang terbatas namun signifikan, termasuk potensi untuk berdiferensiasi menjadi sel mirip otot dalam kondisi tertentu, menjadikannya model penting untuk mempelajari konsekuensi molekuler mutasi WT1.

Untuk mengatasi keterbatasan umur sel Wilms1 primer, garis sel imWilms1 dibuat dengan memasukkan antigen T besar SV40 mutan tiga kali lipat (U19dl89-97tsA58) ke dalam sel tumor asli, yang memfasilitasi pengabadiannya. Modifikasi ini memungkinkan sel imWilms1 untuk berkembang biak tanpa batas waktu dengan tetap mempertahankan stabilitas kromosom, sehingga menawarkan model yang dapat diandalkan untuk studi jangka panjang. Sel imWilms1 yang diabadikan terus menunjukkan mutasi WT1 yang sama dan mempertahankan karakteristik mesenkim dari garis induk Wilms1.

Selain fitur genetik dan fenotipiknya, garis sel imWilms1 telah dianalisis secara ekstensif untuk aktivitas jalur pensinyalannya. Studi proteomik telah mengungkapkan fosforilasi dan aktivasi beberapa reseptor tirosin kinase (RTK), termasuk EGFR, PDGFRβ, dan AXL, dengan aktivasi hilir jalur pensinyalan MAPK. Aktivasi yang konsisten dari jalur ini dalam sel imWilms1 menggarisbawahi relevansinya untuk mengeksplorasi strategi terapi yang ditargetkan pada tumor Wilms. Secara keseluruhan, imWilms1 berfungsi sebagai model yang kuat dan berjangka panjang untuk menyelidiki mekanisme molekuler yang mendasari perkembangan dan perkembangan tumor Wilms, terutama yang didorong oleh mutasi WT1 dan jalur pensinyalan yang menyimpang.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami