imWilms1

Die Wilms1-Zelllinie stammt ursprünglich von einem primären Wilms-Tumor, der bei einem Patienten mit großen beidseitigen Nierentumoren diagnostiziert wurde, einer charakteristischen Form des Wilms-Tumors (Nephroblastom). Diese Zelllinie weist eine homozygote Nonsense-Mutation im WT1-Gen auf (c.149 C>A, p.S50X), die zur Bildung eines verkürzten, nicht funktionsfähigen WT1-Proteins führt. WT1 ist ein entscheidendes Gen für die Nierenentwicklung, und seine Mutation steht in engem Zusammenhang mit der Pathogenese des Wilms-Tumors, insbesondere bei Tumoren, die eine stromale Differenzierung aufweisen. Wilms1-Zellen weisen einen stabilen Karyotyp ohne signifikante Chromosomenanomalien auf. Sie sind durch einen mesenchymalen Phänotyp gekennzeichnet, der Vimentin exprimiert, während epitheliale Marker wie Zytokeratin fehlen. Die Linie zeigt eine begrenzte, aber signifikante Fähigkeit zur mesenchymalen Differenzierung, einschließlich der Fähigkeit, sich unter bestimmten Bedingungen in muskelähnliche Zellen zu differenzieren, was sie zu einem wichtigen Modell für die Untersuchung der molekularen Folgen von WT1-Mutationen macht.

Um die begrenzte Lebensdauer der primären Wilms1-Zellen zu überwinden, wurde die imWilms1-Zelllinie durch die Einführung eines dreifach mutierten SV40 large T-Antigens (U19dl89-97tsA58) in die ursprünglichen Tumorzellen etabliert, was ihre Immortalisierung erleichtert. Dank dieser Modifikation können sich imWilms1-Zellen unbegrenzt vermehren und gleichzeitig die Chromosomenstabilität beibehalten, so dass sie ein zuverlässiges Modell für Langzeitstudien darstellen. Die immortalisierten imWilms1-Zellen weisen weiterhin die gleiche WT1-Mutation auf und behalten die mesenchymalen Eigenschaften der Wilms1-Elternlinie.

Zusätzlich zu ihren genetischen und phänotypischen Merkmalen wurde die imWilms1-Zelllinie umfassend auf ihre Signalwegaktivität untersucht. Proteomische Untersuchungen haben die Phosphorylierung und Aktivierung mehrerer Rezeptortyrosinkinasen (RTKs), einschließlich EGFR, PDGFRβ und AXL, mit nachgeschalteter Aktivierung der MAPK-Signalwege ergeben. Die konsequente Aktivierung dieser Signalwege in imWilms1-Zellen unterstreicht ihre Bedeutung für die Erforschung gezielter therapeutischer Strategien bei Wilms-Tumoren. Insgesamt dient imWilms1 als robustes und langfristiges Modell für die Untersuchung der molekularen Mechanismen, die der Entwicklung und dem Fortschreiten des Wilms-Tumors zugrunde liegen, insbesondere derjenigen, die durch WT1-Mutationen und abweichende Signalwege angetrieben werden.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung