imWilms1

La línea celular Wilms1 se derivó originalmente de un tumor de Wilms primario, obtenido de un paciente diagnosticado de grandes tumores renales bilaterales, una presentación característica del tumor de Wilms (nefroblastoma). Esta línea celular alberga una mutación homocigota sin sentido en el gen WT1 (c.149 C>A, p.S50X), que conduce a la producción de una proteína WT1 truncada y no funcional. WT1 es un gen crítico en el desarrollo renal, y su mutación está estrechamente asociada con la patogénesis del tumor de Wilms, particularmente en tumores que exhiben diferenciación estromal. Las células Wilms1 muestran un cariotipo estable sin anomalías cromosómicas significativas, y se caracterizan por un fenotipo mesenquimal, expresando vimentina mientras carecen de marcadores epiteliales como la citoqueratina. La línea muestra una capacidad limitada pero significativa de diferenciación mesenquimal, incluido el potencial de diferenciarse en células de tipo muscular en condiciones específicas, lo que la convierte en un modelo crucial para estudiar las consecuencias moleculares de las mutaciones de WT1.

Para superar la limitada vida útil de las células Wilms1 primarias, se estableció la línea celular imWilms1 introduciendo un antígeno SV40 gran T triple mutante (U19dl89-97tsA58) en las células tumorales originales, facilitando su inmortalización. Esta modificación permite a las células imWilms1 proliferar indefinidamente manteniendo la estabilidad cromosómica, ofreciendo así un modelo fiable para estudios a largo plazo. Las células imWilms1 inmortalizadas siguen presentando la misma mutación WT1 y conservan las características mesenquimales de la línea progenitora Wilms1.

Además de sus características genéticas y fenotípicas, la línea celular imWilms1 ha sido ampliamente analizada en cuanto a su actividad en la vía de señalización. Los estudios proteómicos han revelado la fosforilación y activación de varios receptores tirosina quinasa (RTKs), incluyendo EGFR, PDGFRβ, y AXL, con la activación de las vías de señalización MAPK. La consistente activación de estas vías en las células imWilms1 subraya su relevancia para explorar estrategias terapéuticas dirigidas en el tumor de Wilms. En general, imWilms1 sirve como modelo robusto y a largo plazo para investigar los mecanismos moleculares que subyacen al desarrollo y la progresión del tumor de Wilms, en particular los impulsados por mutaciones en WT1 y vías de señalización aberrantes.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía