imWilms1

Клітинна лінія Wilms1 спочатку була отримана з первинної пухлини Вільмса, отриманої від пацієнта з діагнозом великих двосторонніх пухлин нирок, характерних для пухлини Вільмса (нефробластоми). Ця клітинна лінія має гомозиготну нонсенс-мутацію в гені WT1 (c.149 C>A, p.S50X), що призводить до вироблення усіченого, нефункціонального білка WT1. WT1 є критично важливим геном для розвитку нирок, і його мутація тісно пов'язана з патогенезом пухлини Вільмса, особливо в пухлинах, що демонструють стромальну диференціацію. Клітини лінії Wilms1 мають стабільний каріотип без значних хромосомних порушень і характеризуються мезенхімальним фенотипом, експресують віментин, але не мають епітеліальних маркерів, таких як цитокератин. Лінія демонструє обмежену, але значну здатність до мезенхімальної диференціації, включаючи потенційну можливість диференціюватися в м'язові клітини за певних умов, що робить її важливою моделлю для вивчення молекулярних наслідків мутацій WT1.

Щоб подолати обмежену тривалість життя первинних клітин Wilms1, було створено клітинну лінію imWilms1 шляхом введення потрійного мутантного великого Т-антигену SV40 (U19dl89-97tsA58) у вихідні пухлинні клітини, що полегшує їх імморталізацію. Ця модифікація дозволяє клітинам imWilms1 проліферувати нескінченно довго, зберігаючи хромосомну стабільність, пропонуючи таким чином надійну модель для довгострокових досліджень. Імморталізовані клітини imWilms1 продовжують демонструвати ту саму мутацію WT1 і зберігають мезенхімальні характеристики батьківської лінії Wilms1.

На додаток до генетичних та фенотипічних особливостей, клітинна лінія imWilms1 була детально проаналізована на предмет активності сигнальних шляхів. Протеомні дослідження виявили фосфорилювання та активацію декількох рецепторних тирозинкіназ (RTK), включаючи EGFR, PDGFRβ та AXL, з подальшою активацією сигнальних шляхів MAPK. Послідовна активація цих шляхів у клітинах imWilms1 підкреслює їх актуальність для вивчення таргетних терапевтичних стратегій при пухлині Вільмса. В цілому, imWilms1 слугує надійною та довготривалою моделлю для дослідження молекулярних механізмів, що лежать в основі розвитку та прогресування пухлини Вільмса, особливо тих, що зумовлені мутаціями WT1 та аберантними сигнальними шляхами.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>