imWilms1

Клетъчната линия Wilms1 първоначално е получена от първичен тумор на Уилмс, получен от пациент, диагностициран с големи двустранни тумори на бъбреците, което е характерна проява на тумора на Уилмс (нефробластом). Тази клетъчна линия е носител на хомозиготна безсмислена мутация в гена WT1 (c.149 C>A, p.S50X), която води до производството на съкратен, нефункционален протеин WT1. WT1 е критичен ген в развитието на бъбреците и неговата мутация е тясно свързана с патогенезата на тумора на Уилмс, особено при тумори, проявяващи стромална диференциация. Клетките на Wilms1 показват стабилен кариотип без значителни хромозомни аномалии и се характеризират с мезенхимен фенотип, като експресират виментин, а липсват епителни маркери като цитокератин. Линията показва ограничена, но значителна способност за мезенхимно диференциране, включително потенциал за диференциране в мускулоподобни клетки при специфични условия, което я прави важен модел за изследване на молекулярните последици от мутациите на WT1.

За да се преодолее ограничената продължителност на живота на първичните клетки Wilms1, беше създадена клетъчната линия imWilms1 чрез въвеждане на тройно мутирал голям Т антиген на SV40 (U19dl89-97tsA58) в оригиналните туморни клетки, което улеснява тяхното безсмъртие. Тази модификация позволява на клетките imWilms1 да се размножават неограничено, като същевременно запазват хромозомната си стабилност, като по този начин предлагат надежден модел за дългосрочни изследвания. Имортализираните клетки imWilms1 продължават да проявяват същата мутация WT1 и запазват мезенхимните характеристики на родителската линия Wilms1.

В допълнение към генетичните и фенотипните си характеристики клетъчната линия imWilms1 е подробно анализирана за активността на сигналните ѝ пътища. Протеомичните изследвания разкриха фосфорилиране и активиране на няколко рецепторни тирозинкинази (RTK), включително EGFR, PDGFRβ и AXL, с последващо активиране на MAPK сигналните пътища. Последователното активиране на тези пътища в клетките imWilms1 подчертава значението им за проучване на целеви терапевтични стратегии при тумора на Wilms. Като цяло imWilms1 служи като стабилен и дългосрочен модел за изследване на молекулярните механизми, които са в основата на развитието и прогресията на тумора на Wilms, особено на тези, които се дължат на мутации на WT1 и аберантни сигнални пътища.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация