imWilms1

Η κυτταρική σειρά Wilms1 προήλθε αρχικά από έναν πρωτοπαθή όγκο Wilms, ο οποίος προήλθε από ασθενή που διαγνώστηκε με μεγάλους αμφοτερόπλευρους νεφρικούς όγκους, μια χαρακτηριστική παρουσίαση του όγκου Wilms (νεφροβλάστωμα). Αυτή η κυτταρική σειρά φέρει μια ομόζυγη μετάλλαξη nonsense στο γονίδιο WT1 (c.149 C>A, p.S50X), που οδηγεί στην παραγωγή μιας κουτσουρεμένης, μη λειτουργικής πρωτεΐνης WT1. Το WT1 είναι ένα κρίσιμο γονίδιο στην ανάπτυξη των νεφρών και η μετάλλαξή του συνδέεται στενά με την παθογένεια του όγκου Wilms, ιδίως σε όγκους που παρουσιάζουν στρωματική διαφοροποίηση. Τα κύτταρα Wilms1 εμφανίζουν σταθερό καρυότυπο χωρίς σημαντικές χρωμοσωμικές ανωμαλίες και χαρακτηρίζονται από μεσεγχυματικό φαινότυπο, εκφράζοντας βιμεντίνη, ενώ στερούνται επιθηλιακών δεικτών όπως η κυτταροκερατίνη. Η σειρά παρουσιάζει περιορισμένη αλλά σημαντική ικανότητα μεσεγχυματικής διαφοροποίησης, συμπεριλαμβανομένης της δυνατότητας διαφοροποίησης σε μυϊκά κύτταρα υπό συγκεκριμένες συνθήκες, καθιστώντας την ένα κρίσιμο μοντέλο για τη μελέτη των μοριακών συνεπειών των μεταλλάξεων του WT1.

Για να ξεπεραστεί η περιορισμένη διάρκεια ζωής των πρωτογενών κυττάρων Wilms1, δημιουργήθηκε η κυτταρική σειρά imWilms1 με την εισαγωγή ενός τριπλά μεταλλαγμένου αντιγόνου SV40 large T (U19dl89-97tsA58) στα αρχικά καρκινικά κύτταρα, διευκολύνοντας την αθανασία τους. Η τροποποίηση αυτή επιτρέπει στα κύτταρα imWilms1 να πολλαπλασιάζονται επ' αόριστον, διατηρώντας παράλληλα τη χρωμοσωμική σταθερότητα, προσφέροντας έτσι ένα αξιόπιστο μοντέλο για μακροχρόνιες μελέτες. Τα αθάνατα κύτταρα imWilms1 συνεχίζουν να εμφανίζουν την ίδια μετάλλαξη WT1 και διατηρούν τα μεσεγχυματικά χαρακτηριστικά της γονικής σειράς Wilms1.

Εκτός από τα γενετικά και φαινοτυπικά χαρακτηριστικά της, η κυτταρική σειρά imWilms1 έχει αναλυθεί εκτενώς ως προς τη δραστηριότητα των σηματοδοτικών μονοπατιών της. Οι πρωτεομικές μελέτες αποκάλυψαν τη φωσφορυλίωση και ενεργοποίηση διαφόρων κινάσων τυροσίνης υποδοχέα (RTKs), συμπεριλαμβανομένων των EGFR, PDGFRβ και AXL, με επακόλουθη ενεργοποίηση των σηματοδοτικών μονοπατιών MAPK. Η συνεπής ενεργοποίηση αυτών των μονοπατιών στα κύτταρα imWilms1 υπογραμμίζει τη σημασία τους για τη διερεύνηση στοχευμένων θεραπευτικών στρατηγικών στον όγκο Wilms. Συνολικά, το imWilms1 χρησιμεύει ως ένα ισχυρό και μακροπρόθεσμο μοντέλο για τη διερεύνηση των μοριακών μηχανισμών που διέπουν την ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου Wilms, ιδίως εκείνων που οδηγούνται από μεταλλάξεις του WT1 και ανώμαλα μονοπάτια σηματοδότησης.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης