imWilms1

Wilms1-cellelinjen stammer oprindeligt fra en primær Wilms-tumor fra en patient, der blev diagnosticeret med store bilaterale nyretumorer, en karakteristisk præsentation af Wilms-tumor (nefroblastom). Denne cellelinje har en homozygot nonsensmutation i WT1-genet (c.149 C>A, p.S50X), hvilket fører til produktion af et afkortet, ikke-funktionelt WT1-protein. WT1 er et kritisk gen i nyreudvikling, og dets mutation er tæt forbundet med patogenesen af Wilms-tumor, især i tumorer, der udviser stromal differentiering. Wilms1-celler har en stabil karyotype uden væsentlige kromosomale abnormiteter, og de er karakteriseret ved en mesenkymfænotype, der udtrykker vimentin, mens de mangler epitelmarkører som cytokeratin. Linjen viser en begrænset, men betydelig kapacitet til mesenkymal differentiering, herunder potentialet til at differentiere til muskellignende celler under specifikke forhold, hvilket gør den til en afgørende model til undersøgelse af de molekylære konsekvenser af WT1-mutationer.

For at overvinde den begrænsede levetid for de primære Wilms1-celler blev imWilms1-cellelinjen etableret ved at indføre et tredobbelt muteret SV40 stort T-antigen (U19dl89-97tsA58) i de oprindelige tumorceller, hvilket letter deres udødelighed. Denne modifikation gør det muligt for imWilms1-celler at formere sig på ubestemt tid, samtidig med at kromosomstabiliteten opretholdes, hvilket giver en pålidelig model til langtidsstudier. De udødelige imWilms1-celler udviser fortsat den samme WT1-mutation og bevarer de mesenkymale egenskaber ved den oprindelige Wilms1-linje.

Ud over sine genetiske og fænotypiske egenskaber er imWilms1-cellelinjen blevet grundigt analyseret for sin signalvejsaktivitet. Proteomiske undersøgelser har afsløret fosforylering og aktivering af flere receptortyrosinkinaser (RTK'er), herunder EGFR, PDGFRβ og AXL, med downstream-aktivering af MAPK-signalvejene. Den konsekvente aktivering af disse veje i imWilms1-celler understreger deres relevans for at udforske målrettede terapeutiske strategier i Wilms-tumor. Alt i alt fungerer imWilms1 som en robust og langsigtet model til undersøgelse af de molekylære mekanismer, der ligger til grund for udvikling og progression af Wilms-tumorer, især dem, der er drevet af WT1-mutationer og afvigende signalveje.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring