imWilms1

สายเซลล์ Wilms1 ถูกแยกออกมาจากเนื้องอก Wilms ชนิดปฐมภูมิ ซึ่งได้มาจากผู้ป่วยที่ได้รับการวินิจฉัยว่าเป็นเนื้องอกขนาดใหญ่ที่ไตทั้งสองข้าง ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของเนื้องอก Wilms (เนื้องอกไตในเด็ก) สายเซลล์นี้มีลักษณะกลายพันธุ์แบบโฮโมไซโกตชนิด nonsense mutation ในยีน WT1 (c.149 C>A, p.S50X) ซึ่งนำไปสู่การผลิตโปรตีน WT1 ที่ขาดบางส่วนและไม่สามารถทำงานได้WT1 เป็นยีนที่สำคัญในการพัฒนาของไต และการกลายพันธุ์ของยีนนี้มีความเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับการเกิดโรคเนื้องอกวิลส์ม์ โดยเฉพาะในเนื้องอกที่มีการเปลี่ยนแปลงของสโตรมา เซลล์วิลส์ม์1 แสดงลักษณะโครโมโซมที่คงที่โดยไม่มีลักษณะผิดปกติของโครโมโซมที่สำคัญ และพวกมันมีลักษณะของฟีโนไทป์เมเซนไคม์ โดยแสดงออกของวีเมนตินในขณะที่ขาดตัวบ่งชี้ของเซลล์เยื่อบุผิวเช่นไซโตเคราตินเส้นแสดงถึงความสามารถที่จำกัดแต่มีนัยสำคัญในการเปลี่ยนแปลงเป็นเซลล์เมเซนไคม์ รวมถึงศักยภาพในการเปลี่ยนแปลงเป็นเซลล์คล้ายกล้ามเนื้อภายใต้เงื่อนไขเฉพาะ ทำให้เป็นแบบจำลองที่สำคัญสำหรับการศึกษาผลกระทบระดับโมเลกุลของการกลายพันธุ์ของ WT1

เพื่อเอาชนะข้อจำกัดด้านอายุการใช้งานของเซลล์ Wilms1 หลัก จึงได้สร้างสายเซลล์ imWilms1 ขึ้นโดยการนำแอนติเจน SV40 ขนาดใหญ่แบบสามกลายพันธุ์ (U19dl89-97tsA58) เข้าสู่เซลล์เนื้องอกต้นกำเนิด ส่งเสริมการคงอยู่ตลอดไปของเซลล์ การดัดแปลงนี้ทำให้เซลล์ imWilms1 สามารถแบ่งตัวได้อย่างไม่จำกัดในขณะที่ยังคงความเสถียรของโครโมโซม จึงเป็นแบบจำลองที่เชื่อถือได้สำหรับการศึกษาในระยะยาวเซลล์ imWilms1 ที่ถูกทำให้เป็นอมตะยังคงแสดงการกลายพันธุ์ของ WT1 เดียวกันและรักษาลักษณะของเซลล์เมเซนไคม์ของสายพันธุ์ Wilms1 ต้นกำเนิด

นอกเหนือจากลักษณะทางพันธุกรรมและฟีโนไทป์แล้ว สายเซลล์ imWilms1 ยังได้รับการวิเคราะห์อย่างกว้างขวางเกี่ยวกับกิจกรรมของเส้นทางการส่งสัญญาณ การศึกษาโปรตีโอมิกส์ได้เปิดเผยการฟอสโฟรีเลชันและการกระตุ้นของไทโรซีนไคเนสตัวรับหลายชนิด (RTKs) รวมถึง EGFR, PDGFRβ และ AXL ซึ่งมีการกระตุ้นเส้นทางสัญญาณ MAPK ในระดับถัดไปการกระตุ้นอย่างต่อเนื่องของเส้นทางเหล่านี้ในเซลล์ imWilms1 เน้นย้ำถึงความสำคัญของพวกมันในการสำรวจกลยุทธ์การรักษาแบบมุ่งเป้าในเนื้องอก Wilms โดยรวมแล้ว imWilms1 ทำหน้าที่เป็นแบบจำลองที่แข็งแกร่งและยาวนานสำหรับการศึกษาเชิงลึกกลไกโมเลกุลที่อยู่เบื้องหลังการพัฒนาและการลุกลามของเนื้องอก Wilms โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่เกิดจากกลายพันธุ์ของ WT1 และเส้นทางสัญญาณที่ผิดปกติ

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.