imWilms1

La linea cellulare Wilms1 è stata originariamente derivata da un tumore di Wilms primario, ottenuto da un paziente a cui era stato diagnosticato un grande tumore renale bilaterale, una presentazione caratteristica del tumore di Wilms (nefroblastoma). Questa linea cellulare presenta una mutazione omozigote nonsense nel gene WT1 (c.149 C>A, p.S50X), che porta alla produzione di una proteina WT1 tronca e non funzionale. WT1 è un gene critico nello sviluppo del rene e la sua mutazione è strettamente associata alla patogenesi del tumore di Wilms, in particolare nei tumori che presentano una differenziazione stromale. Le cellule Wilms1 presentano un cariotipo stabile senza anomalie cromosomiche significative e sono caratterizzate da un fenotipo mesenchimale, che esprime la vimentina e manca di marcatori epiteliali come la citocheratina. La linea mostra una capacità limitata ma significativa di differenziazione mesenchimale, compreso il potenziale di differenziazione in cellule simili ai muscoli in condizioni specifiche, che la rende un modello cruciale per lo studio delle conseguenze molecolari delle mutazioni WT1.

Per superare la durata limitata delle cellule Wilms1 primarie, è stata creata la linea cellulare imWilms1 introducendo un triplo mutante dell'antigene SV40 large T (U19dl89-97tsA58) nelle cellule tumorali originali, facilitandone l'immortalizzazione. Questa modifica consente alle cellule imWilms1 di proliferare indefinitamente mantenendo la stabilità cromosomica, offrendo così un modello affidabile per studi a lungo termine. Le cellule immortalizzate imWilms1 continuano a presentare la stessa mutazione WT1 e a mantenere le caratteristiche mesenchimali della linea Wilms1 madre.

Oltre alle sue caratteristiche genetiche e fenotipiche, la linea cellulare imWilms1 è stata ampiamente analizzata per l'attività delle sue vie di segnalazione. Gli studi di proteomica hanno rivelato la fosforilazione e l'attivazione di diverse tirosin-chinasi recettoriali (RTK), tra cui EGFR, PDGFRβ e AXL, con attivazione a valle delle vie di segnalazione MAPK. L'attivazione costante di queste vie nelle cellule imWilms1 sottolinea la loro importanza per l'esplorazione di strategie terapeutiche mirate nel tumore di Wilms. Nel complesso, imWilms1 funge da modello robusto e a lungo termine per studiare i meccanismi molecolari alla base dello sviluppo e della progressione del tumore di Wilms, in particolare quelli guidati da mutazioni WT1 e da vie di segnalazione aberranti.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia