imWilms1

Wilms1-cellinjen härrör ursprungligen från en primär Wilms-tumör, som erhölls från en patient som diagnostiserats med stora bilaterala njurtumörer, en karakteristisk bild av Wilms-tumör (nefroblastom). Denna cellinje har en homozygot nonsensmutation i WT1-genen (c.149 C>A, p.S50X), vilket leder till produktion av ett trunkerat, icke-funktionellt WT1-protein. WT1 är en kritisk gen för njurarnas utveckling och dess mutation är nära förknippad med patogenesen för Wilms tumör, särskilt i tumörer som uppvisar stromal differentiering. Wilms1-cellerna uppvisar en stabil karyotyp utan signifikanta kromosomavvikelser och de kännetecknas av en mesenkymal fenotyp som uttrycker vimentin men saknar epiteliala markörer som cytokeratin. Linjen uppvisar en begränsad men signifikant kapacitet för mesenkymal differentiering, inklusive potentialen att differentieras till muskelliknande celler under specifika förhållanden, vilket gör den till en viktig modell för att studera de molekylära konsekvenserna av WT1-mutationer.

För att övervinna den begränsade livslängden hos de primära Wilms1-cellerna etablerades imWilms1-cellinjen genom att införa en trippelmutant SV40 large T-antigen (U19dl89-97tsA58) i de ursprungliga tumörcellerna, vilket underlättade deras odödlighet. Denna modifiering gör att imWilms1-cellerna kan föröka sig på obestämd tid med bibehållen kromosomstabilitet, vilket ger en tillförlitlig modell för långtidsstudier. De odödliga imWilms1-cellerna fortsätter att uppvisa samma WT1-mutation och bibehåller de mesenkymala egenskaperna hos den ursprungliga Wilms1-linjen.

Förutom de genetiska och fenotypiska egenskaperna har imWilms1-cellinjen analyserats ingående med avseende på dess signalvägsaktivitet. Proteomiska studier har visat på fosforylering och aktivering av flera receptortyrosinkinaser (RTK), inklusive EGFR, PDGFRβ och AXL, med nedströmsaktivering av MAPK-signalvägarna. Den konsekventa aktiveringen av dessa signalvägar i imWilms1-celler understryker deras relevans för att utforska riktade terapeutiska strategier för Wilms tumör. Sammantaget fungerar imWilms1 som en robust och långsiktig modell för att undersöka de molekylära mekanismer som ligger till grund för utveckling och progression av Wilms-tumörer, särskilt sådana som drivs av WT1-mutationer och avvikande signalvägar.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring