imWilms1

A Wilms1 sejtvonal eredetileg egy primer Wilms-tumorból származik, amelyet egy olyan betegtől nyertek, akinél nagy kétoldali vesedaganatot diagnosztizáltak, ami a Wilms-tumor (nefroblastoma) jellegzetes megjelenési formája. Ez a sejtvonal homozigóta nonszensz mutációt hordoz a WT1 génben (c.149 C>A, p.S50X), ami egy csonka, nem funkcionális WT1 fehérje termelődéséhez vezet. A WT1 kritikus gén a vese fejlődésében, és mutációja szorosan összefügg a Wilms-tumor patogenezisével, különösen a stromális differenciálódást mutató tumorokban. A Wilms1 sejtek stabil kariotípust mutatnak jelentős kromoszóma-rendellenességek nélkül, és mesenchymális fenotípus jellemzi őket, vimentint expresszálnak, miközben hiányoznak belőlük az olyan epithelialis markerek, mint a citokeratin. A vonal korlátozott, de jelentős mesenchymális differenciálódási képességet mutat, beleértve az izomszerű sejtekké való differenciálódás lehetőségét is bizonyos körülmények között, ami kulcsfontosságú modellé teszi a WT1 mutációk molekuláris következményeinek tanulmányozásához.

Az elsődleges Wilms1 sejtek korlátozott élettartamának leküzdése érdekében az imWilms1 sejtvonalat úgy hoztuk létre, hogy az eredeti tumorsejtekbe egy háromszorosan mutáns SV40 nagy T antigént (U19dl89-97tsA58) vittünk be, ami megkönnyíti az immortalizációjukat. Ez a módosítás lehetővé teszi, hogy az imWilms1 sejtek korlátlanul szaporodjanak, miközben megőrzik a kromoszóma-stabilitást, így megbízható modellt kínálnak hosszú távú vizsgálatokhoz. Az immortalizált imWilms1 sejtek továbbra is ugyanazt a WT1 mutációt mutatják, és megtartják a szülő Wilms1 vonal mesenchymális jellemzőit.

Genetikai és fenotípusos jellemzői mellett az imWilms1 sejtvonalat széleskörűen elemezték jelátviteli útvonalaktivitása szempontjából. A proteomikai vizsgálatok számos receptor-tirozin-kináz (RTK), köztük az EGFR, a PDGFRβ és az AXL foszforilációját és aktiválódását mutatták ki, a MAPK jelátviteli útvonalak downstream aktiválódásával. Ezen útvonalak következetes aktiválása az imWilms1 sejtekben aláhúzza jelentőségüket a Wilms-tumor célzott terápiás stratégiáinak feltárása szempontjából. Összességében az imWilms1 egy robusztus és hosszú távú modellként szolgál a Wilms-tumor kialakulásának és progressziójának hátterében álló molekuláris mechanizmusok vizsgálatára, különösen a WT1 mutációk és aberráns jelátviteli útvonalak által vezéreltek esetében.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban