imWilms1

Wilms1 šūnu līnija sākotnēji tika iegūta no primārā Vilmsa audzēja, kas iegūts no pacienta, kuram diagnosticēti lieli abpusēji nieru audzēji, kas ir raksturīgs Vilmsa audzēja (nefroblastomas) izpausmes veids. Šai šūnu līnijai ir homozigotiska bezjēdzīga WT1 gēna mutācija (c.149 C>A, p.S50X), kas izraisa saīsināta, nefunkcionāla WT1 proteīna veidošanos. WT1 ir ļoti svarīgs gēns nieru attīstībā, un tā mutācija ir cieši saistīta ar Vilmsa audzēja patoģenēzi, jo īpaši audzējos, kam raksturīga stromas diferenciācija. Wilms1 šūnām ir stabils kariotips bez būtiskām hromosomālām anomālijām, un tām ir raksturīgs mezenhīma fenotips, kas izpaužas kā vimentīna ekspresija, bet nav epitēlija marķieru, piemēram, citokeratīna. Šai līnijai piemīt ierobežota, bet nozīmīga mezenhimālās diferenciācijas spēja, tostarp spēja noteiktos apstākļos diferencēties muskuļiem līdzīgās šūnās, kas padara to par svarīgu modeli WT1 mutāciju molekulāro seku izpētei.

Lai pārvarētu primāro Wilms1 šūnu ierobežoto dzīves ilgumu, tika izveidota imWilms1 šūnu līnija, ieviešot sākotnējās audzēja šūnās trīskāršu mutantu SV40 lielo T antigēnu (U19dl89-97tsA58), tādējādi veicinot to imortalizāciju. Šī modifikācija ļauj imWilms1 šūnām vairoties neierobežoti ilgi, vienlaikus saglabājot hromosomu stabilitāti, tādējādi piedāvājot uzticamu modeli ilgtermiņa pētījumiem. Imortalizētās imWilms1 šūnas turpina uzrādīt to pašu WT1 mutāciju un saglabā mezenhimālās īpašības, kādas piemīt vecākajai Wilms1 līnijai.

Papildus ģenētiskajām un fenotipiskajām īpašībām imWilms1 šūnu līnija ir plaši analizēta attiecībā uz tās signālu ceļu aktivitāti. Proteomikas pētījumi atklāja vairāku receptoru tirozīna kināžu (RTK), tostarp EGFR, PDGFRβ un AXL, fosforilēšanu un aktivizēšanu ar pakārtotu MAPK signalizācijas ceļu aktivizēšanu. Šo ceļu konsekventa aktivizācija imWilms1 šūnās uzsver to nozīmi mērķtiecīgu Vilmsa audzēja terapeitisko stratēģiju izpētē. Kopumā imWilms1 kalpo par stabilu un ilgtermiņa modeli, lai pētītu molekulāros mehānismus, kas ir Vilmsa audzēja attīstības un progresēšanas pamatā, jo īpaši tos, ko izraisa WT1 mutācijas un novirzes signalizācijas ceļos.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu