imWilms1

קו התאים Wilms1 נגזר במקור מגידול Wilms ראשוני, שהושג מחולה שאובחן עם גידולים גדולים בשתי הכליות, תופעה אופיינית לגידול Wilms (נפרובלסטומה). קו תאים זה נושא מוטציה הומוזיגוטית חסרת משמעות בגן WT1 (c.149 C>A, p.S50X), המובילה לייצור חלבון WT1 מקוצר ולא תפקודי. WT1 הוא גן קריטי בהתפתחות הכליות, והמוטציה בו קשורה קשר הדוק לפתוגנזה של גידול וילמס, במיוחד בגידולים המפגינים הבחנה סטרומלית. תאי Wilms1 מציגים קריוטיפ יציב ללא חריגות כרומוזומליות משמעותיות, והם מאופיינים בפנוטיפ מזנכימלי, המבטא וימנטין תוך היעדר סמנים אפיתלליים כמו ציטוקראטין. הקו מציג יכולת מוגבלת אך משמעותית להבחנה מזנכמלית, כולל פוטנציאל להבחנה לתאים דמויי שריר בתנאים ספציפיים, מה שהופך אותו למודל חיוני לחקר ההשלכות המולקולריות של מוטציות WT1.

כדי להתגבר על תוחלת החיים המוגבלת של תאי Wilms1 הראשוניים, שושלת התאים imWilms1 הוקמה על ידי החדרת אנטיגן T גדול SV40 משולש מוטציה (U19dl89-97tsA58) לתאי הגידול המקוריים, מה שמקל על הנצחתם. שינוי זה מאפשר לתאי imWilms1 להתרבות ללא הגבלת זמן תוך שמירה על יציבות כרומוזומלית, ובכך מספק מודל אמין למחקרים ארוכי טווח. תאי imWilms1 המונצחים ממשיכים להפגין את אותה מוטציה WT1 ושומרים על המאפיינים המזנכימליים של קו Wilms1 ההורי.

בנוסף לתכונות הגנטיות והפנוטיפיות שלו, קו התאים imWilms1 נותח בהרחבה על פעילות מסלולי האיתות שלו. מחקרים פרוטאומיים חשפו את הזרחון וההפעלה של מספר קולטני טירוזין קינאז (RTK), כולל EGFR, PDGFRβ ו-AXL, עם הפעלה במורד הזרם של מסלולי האיתות MAPK. הפעלתם העקבית של מסלולים אלה בתאי imWilms1 מדגישה את הרלוונטיות שלהם לחקר אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות בגידול וילמס. בסך הכל, imWilms1 משמש מודל יציב וארוך טווח לחקר המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס התפתחות והתקדמות גידול וילמס, במיוחד אלה המונעים על ידי מוטציות WT1 ומסלולי איתות חריגים.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו