imWilms1

Linia komórkowa Wilms1 została pierwotnie uzyskana z pierwotnego guza Wilmsa, uzyskanego od pacjenta, u którego zdiagnozowano duże obustronne guzy nerek, charakterystyczne dla guza Wilmsa (nephroblastoma). Ta linia komórkowa jest nosicielem homozygotycznej mutacji nonsensownej w genie WT1 (c.149 C>A, p.S50X), prowadzącej do produkcji skróconego, niefunkcjonalnego białka WT1. WT1 jest krytycznym genem w rozwoju nerek, a jego mutacja jest ściśle związana z patogenezą guza Wilmsa, szczególnie w guzach wykazujących różnicowanie zrębu. Komórki Wilmsa1 wykazują stabilny kariotyp bez znaczących nieprawidłowości chromosomalnych i charakteryzują się fenotypem mezenchymalnym, ekspresją wimentyny przy jednoczesnym braku markerów nabłonkowych, takich jak cytokeratyna. Linia wykazuje ograniczoną, ale znaczącą zdolność do różnicowania mezenchymalnego, w tym potencjał do różnicowania się w komórki mięśniopodobne w określonych warunkach, co czyni ją kluczowym modelem do badania molekularnych konsekwencji mutacji WT1.

Aby przezwyciężyć ograniczoną żywotność pierwotnych komórek Wilms1, utworzono linię komórkową imWilms1 poprzez wprowadzenie potrójnie zmutowanego antygenu SV40 large T (U19dl89-97tsA58) do oryginalnych komórek nowotworowych, ułatwiając ich unieśmiertelnienie. Modyfikacja ta pozwala komórkom imWilms1 proliferować w nieskończoność przy zachowaniu stabilności chromosomalnej, oferując tym samym niezawodny model do badań długoterminowych. Unieśmiertelnione komórki imWilms1 nadal wykazują tę samą mutację WT1 i zachowują cechy mezenchymalne macierzystej linii Wilms1.

Oprócz cech genetycznych i fenotypowych, linia komórkowa imWilms1 została szeroko przeanalizowana pod kątem aktywności szlaku sygnałowego. Badania proteomiczne ujawniły fosforylację i aktywację kilku receptorowych kinaz tyrozynowych (RTK), w tym EGFR, PDGFRβ i AXL, z aktywacją szlaków sygnałowych MAPK. Konsekwentna aktywacja tych szlaków w komórkach imWilms1 podkreśla ich znaczenie dla badania ukierunkowanych strategii terapeutycznych w guzie Wilmsa. Ogólnie rzecz biorąc, imWilms1 służy jako solidny i długoterminowy model do badania mechanizmów molekularnych leżących u podstaw rozwoju i progresji guza Wilmsa, szczególnie tych napędzanych przez mutacje WT1 i nieprawidłowe szlaki sygnałowe.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym