imWilms1

A linha celular Wilms1 foi originalmente derivada de um tumor primário de Wilms, obtido de um doente a quem foram diagnosticados grandes tumores renais bilaterais, uma apresentação caraterística do tumor de Wilms (nefroblastoma). Esta linha celular tem uma mutação homozigótica sem sentido no gene WT1 (c.149 C>A, p.S50X), que leva à produção de uma proteína WT1 truncada e não funcional. O WT1 é um gene crítico no desenvolvimento dos rins e a sua mutação está intimamente associada à patogénese do tumor de Wilms, particularmente em tumores que exibem diferenciação estromal. As células Wilms1 apresentam um cariótipo estável, sem anomalias cromossómicas significativas, e caracterizam-se por um fenótipo mesenquimal, expressando vimentina, mas sem marcadores epiteliais como a citoqueratina. A linha mostra uma capacidade limitada, mas significativa, de diferenciação mesenquimal, incluindo o potencial para se diferenciar em células do tipo muscular em condições específicas, tornando-a um modelo crucial para o estudo das consequências moleculares das mutações WT1.

Para ultrapassar o tempo de vida limitado das células Wilms1 primárias, foi criada a linha celular imWilms1 através da introdução de um antigénio SV40 large T triplo mutante (U19dl89-97tsA58) nas células tumorais originais, facilitando a sua imortalização. Esta modificação permite que as células imWilms1 proliferem indefinidamente, mantendo a estabilidade cromossómica, oferecendo assim um modelo fiável para estudos a longo prazo. As células imWilms1 imortalizadas continuam a apresentar a mesma mutação WT1 e retêm as caraterísticas mesenquimais da linha Wilms1 parental.

Para além das suas caraterísticas genéticas e fenotípicas, a linha celular imWilms1 foi extensivamente analisada quanto à atividade da sua via de sinalização. Estudos proteómicos revelaram a fosforilação e ativação de várias tirosina-quinases de receptores (RTKs), incluindo EGFR, PDGFRβ e AXL, com ativação a jusante das vias de sinalização MAPK. A ativação consistente dessas vias nas células imWilms1 ressalta sua relevância para a exploração de estratégias terapêuticas direcionadas no tumor de Wilms. De um modo geral, o imWilms1 constitui um modelo robusto e de longa duração para a investigação dos mecanismos moleculares subjacentes ao desenvolvimento e progressão do tumor de Wilms, em particular os que são provocados por mutações do WT1 e por vias de sinalização aberrantes.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia