imWilms1

تم اشتقاق سلالة خلايا ويلمز1 في الأصل من ورم ويلمز الأولي، الذي تم الحصول عليه من مريض تم تشخيص إصابته بأورام الكلى الثنائية الكبيرة، وهو عرض مميز لورم ويلمز (ورم أرومي كلوي). يحتوي خط الخلية هذا على طفرة متماثلة الزيجوت في جين WT1 (ج.149 C>A، p.S50X)، مما يؤدي إلى إنتاج بروتين WT1 مبتور وغير وظيفي. يُعد WT1 جينًا حاسمًا في نمو الكلى، وترتبط طفرته ارتباطًا وثيقًا بالتسبب في الإصابة بورم ويلمز، خاصةً في الأورام التي تظهر تمايزًا لحميًا. تُظهر خلايا ويلمز1 نمطاً نووياً مستقراً دون تشوهات كروموسومية كبيرة، وتتميز بنمط ظاهري متوسطي اللُّحْمَة (mesenchymal phenotype)، حيث تُظهر الفيمينتين بينما تفتقر إلى العلامات الظهارية مثل السيتوكراتين. يُظهر هذا الخط قدرة محدودة ولكن كبيرة على التمايز الوسيطة اللُّحمية بما في ذلك القدرة على التمايز إلى خلايا شبيهة بالعضلات في ظل ظروف محددة، مما يجعله نموذجاً مهماً لدراسة العواقب الجزيئية لطفرات WT1.

وللتغلب على العمر الافتراضي المحدود لخلايا ويلمز1 الأولية، تم إنشاء خط خلايا imWilms1 عن طريق إدخال مستضد SV40 T الكبير ثلاثي الطفرات (U19dl89-97tsA58) في الخلايا الورمية الأصلية، مما يسهل عملية خلودها. ويسمح هذا التعديل لخلايا imWilms1 بالتكاثر إلى أجل غير مسمى مع الحفاظ على استقرار الكروموسومات، وبالتالي تقديم نموذج موثوق به للدراسات طويلة الأمد. تستمر خلايا imWilms1 غير الخالدة في إظهار نفس طفرة WT1 وتحتفظ بالخصائص الوسيطة لخط ويلمز1 الأصلي.

وبالإضافة إلى خصائصه الوراثية والمظهرية، تم تحليل خط خلايا imWilms1 على نطاق واسع لمعرفة نشاط مسار إشاراته. وقد كشفت الدراسات البروتينية عن فسفرة وتفعيل العديد من مستقبلات التيروزين كيناز (RTKs)، بما في ذلك EGFR و PDGFRβ و AXL، مع تنشيط مسارات إشارات MAPK في نهاية المطاف. يؤكد التنشيط المستمر لهذه المسارات في خلايا imWilms1 على أهميتها لاستكشاف الاستراتيجيات العلاجية المستهدفة في ورم ويلمز. وبشكل عام، يُستخدم إيمويلمز1 كنموذج قوي وطويل الأمد لدراسة الآليات الجزيئية الكامنة وراء تطور ورم ويلمز وتطوره، خاصةً تلك التي تحركها طفرات WT1 ومسارات الإشارات الشاذة.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان