imWilms1

Wilms1-solulinja on alun perin peräisin primaarisesta Wilmsin kasvaimesta, joka saatiin potilaalta, jolla oli diagnosoitu suuria molemminpuolisia munuaiskasvaimia, mikä on Wilmsin kasvaimen (nefroblastooma) tyypillinen oire. Tässä solulinjassa on homotsygoottinen nonsense-mutaatio WT1-geenissä (c.149 C>A, p.S50X), joka johtaa typistetyn, toimimattoman WT1-proteiinin tuotantoon. WT1 on kriittinen geeni munuaisten kehityksessä, ja sen mutaatio liittyy läheisesti Wilmsin kasvaimen patogeneesiin, erityisesti kasvaimissa, joilla on stroomaalinen erilaistuminen. Wilms1-soluilla on vakaa karyotyyppi ilman merkittäviä kromosomipoikkeavuuksia, ja niille on ominaista mesenkymaalinen fenotyyppi, joka ilmentää vimentiiniä, mutta josta puuttuvat epiteelin merkkiaineet, kuten sytokeratiini. Linjalla on rajallinen mutta merkittävä kyky mesenkymaaliseen erilaistumiseen, mukaan lukien mahdollisuus erilaistua lihaksen kaltaisiksi soluiksi tietyissä olosuhteissa, mikä tekee siitä ratkaisevan tärkeän mallin WT1-mutaatioiden molekulaaristen seurausten tutkimiseen.

Primaaristen Wilms1-solujen rajallisen eliniän voittamiseksi perustettiin imWilms1-solulinja tuomalla alkuperäisiin kasvainsoluihin kolminkertainen mutantti SV40 large T -antigeeni (U19dl89-97tsA58), joka helpottaa niiden kuolemattomuutta. Tämän muutoksen ansiosta imWilms1-solut voivat lisääntyä loputtomiin säilyttäen kromosomistabiilisuuden, mikä tarjoaa luotettavan mallin pitkäaikaisia tutkimuksia varten. Immortalisoiduissa imWilms1-soluissa on edelleen sama WT1-mutaatio, ja ne säilyttävät vanhemman Wilms1-linjan mesenkymaaliset ominaisuudet.

Geneettisten ja fenotyyppisten ominaisuuksien lisäksi imWilms1-solulinjaa on analysoitu laajasti sen signaalireittien aktiivisuuden osalta. Proteomitutkimukset ovat paljastaneet useiden reseptorityrosiinikinaasien (RTK), kuten EGFR:n, PDGFRβ:n ja AXL:n, fosforylaation ja aktivoitumisen sekä MAPK-signalointireittien aktivoitumisen. Näiden reittien johdonmukainen aktivoituminen imWilms1-soluissa korostaa niiden merkitystä Wilmsin kasvaimen kohdennettujen hoitostrategioiden tutkimisessa. Kaiken kaikkiaan imWilms1 toimii vankkana ja pitkäaikaisena mallina Wilmsin kasvaimen kehittymisen ja etenemisen taustalla olevien molekulaaristen mekanismien tutkimiseen, erityisesti WT1-mutaatioiden ja poikkeavien signaalireittien ohjaamien mekanismien.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa