imWilms1

A linhagem celular Wilms1 foi originalmente derivada de um tumor de Wilms primário, obtido de um paciente diagnosticado com grandes tumores renais bilaterais, um quadro clínico característico do tumor de Wilms (nefroblastoma). Essa linhagem celular apresenta uma mutação nonsense homozigótica no gene WT1 (c.149 C>A, p.S50X), levando à produção de uma proteína WT1 truncada e não funcional. O WT1 é um gene essencial no desenvolvimento renal, e sua mutação está intimamente associada à patogênese do tumor de Wilms, particularmente em tumores que apresentam diferenciação estromal. As células Wilms1 apresentam um cariótipo estável, sem anomalias cromossômicas significativas, e são caracterizadas por um fenótipo mesenquimal, expressando vimentina, mas sem marcadores epiteliais como a citoqueratina. A linhagem apresenta uma capacidade limitada, porém significativa, de diferenciação mesenquimal, incluindo o potencial de se diferenciar em células semelhantes às musculares sob condições específicas, tornando-a um modelo crucial para o estudo das consequências moleculares das mutações no WT1.

Para superar a vida útil limitada das células Wilms1 primárias, a linhagem celular imWilms1 foi estabelecida mediante a introdução de um antígeno T grande do SV40 com mutação tripla (U19dl89-97tsA58) nas células tumorais originais, facilitando sua imortalização. Essa modificação permite que as células imWilms1 proliferem indefinidamente, mantendo a estabilidade cromossômica, oferecendo assim um modelo confiável para estudos de longo prazo. As células imWilms1 imortalizadas continuam a apresentar a mesma mutação no WT1 e mantêm as características mesenquimais da linhagem Wilms1 parental.

Além de suas características genéticas e fenotípicas, a linhagem celular imWilms1 foi amplamente analisada quanto à atividade de suas vias de sinalização. Estudos proteômicos revelaram a fosforilação e ativação de vários receptores de tirosina quinase (RTKs), incluindo EGFR, PDGFRβ e AXL, com ativação a jusante das vias de sinalização MAPK. A ativação consistente dessas vias nas células imWilms1 ressalta sua relevância para a exploração de estratégias terapêuticas direcionadas no tumor de Wilms. De modo geral, a imWilms1 serve como um modelo robusto e de longo prazo para investigar os mecanismos moleculares subjacentes ao desenvolvimento e à progressão do tumor de Wilms, particularmente aqueles impulsionados por mutações no WT1 e vias de sinalização anormais.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.