BC-3

A linhagem celular BC-3 é um modelo de linfoma de efusão primário (PEL) humano derivado do derrame pleural de um paciente HIV-negativo. Ela representa um subtipo raro de linfoma não-Hodgkin de células B que normalmente se apresenta como derrames linfomatosos em cavidades corporais, como a pleura, o pericárdio ou o peritônio, frequentemente na ausência de massas tumorais sólidas detectáveis. A BC-3 se distingue por sua infecção exclusiva pelo herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi (KSHV ou HHV-8) e pela ausência completa do vírus de Epstein-Barr (EBV), uma característica que a diferencia da maioria das outras linhagens celulares de PEL, que normalmente apresentam infecção dupla.

Do ponto de vista imunofenotípico, as células BC-3 expressam o antígeno comum dos leucócitos (CD45), mas não apresentam marcadores clássicos de células B (por exemplo, CD19, CD20, CD21, CD22) e de células T (por exemplo, CD2, CD3, CD4, CD5, CD8), o que é consistente com o imunofenótipo indiferenciado da PEL. No entanto, elas apresentam expressão variável de marcadores de ativação, como CD30, CD38, CD54 e HLA-DR. Genotipicamente, a BC-3 exibe rearranjos clonais de genes de imunoglobulina, indicativos de origem em células B, mas não apresenta rearranjos do oncogene c-myc. É importante ressaltar que análises de Southern blot e PCR confirmaram a presença de um genoma intacto do KSHV de aproximadamente 170 kb, e a microscopia eletrônica demonstrou cápsides semelhantes às dos herpesvírus, validando a linhagem como uma fonte produtiva de partículas infecciosas do KSHV.

A BC-3 está incluída no painel LL-100 de linhagens celulares de leucemia e linfoma e se agrupa distintamente com outros modelos de PEL em análises transcriptômicas. Ela apresenta expressão de genes característicos da PEL, como PRDM1/BLIMP1, IL-10, SLAMF7 e membros da família S100A. Esses marcadores refletem um fenótipo de células B pós-centro germinativo e ressaltam a utilidade da BC-3 como um modelo biologicamente relevante para o estudo da patogênese do KSHV, da biologia da PEL e de estratégias terapêuticas direcionadas a neoplasias associadas ao KSHV.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.