TMD8

La línea celular TMD8 es un modelo humano de linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) representativo del subtipo de células B activadas (ABC). Este subtipo se caracteriza por la activación constitutiva de la vía NF-κB, que es esencial para la supervivencia celular. TMD8 presenta CARD11 de tipo salvaje, pero mantiene una fuerte actividad NF-κB, lo que indica una dependencia de la señalización crónica activa del receptor de células B (BCR). Esta dependencia está respaldada por pruebas experimentales que demuestran que el bloqueo de los componentes de la vía BCR -incluidos BTK, CD79A, CD79B e IgM- conduce a la muerte celular en las células TMD8. Además, TMD8 alberga una mutación Y196H en el dominio ITAM de CD79B, una mutación comúnmente encontrada en ABC-DLBCLs que aumenta la expresión del BCR de superficie y atenúa la retroalimentación negativa de la quinasa Lyn, promoviendo así una actividad de señalización sostenida.

Las células TMD8 también demuestran una notable sensibilidad a la inhibición de BCL-2 mediante venetoclax cuando expresan niveles elevados de la proteína BCL-2. Sin embargo, la resistencia al venetoclax en estas células puede estar mediada por la activación de la vía PI3K/AKT, especialmente tras una exposición prolongada al fármaco. Este mecanismo de resistencia implica una reducción de la expresión de PTEN y un aumento de la fosforilación de AKT. Las células TMD8 con resistencia adquirida a venetoclax muestran una mayor susceptibilidad a la inhibición farmacológica de la vía PI3K/AKT, lo que las convierte en un modelo adecuado para el estudio de combinaciones terapéuticas dirigidas a superar la resistencia en linfomas agresivos de células B.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía