TMD8

A linhagem celular TMD8 é um modelo de linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) humano, representativo do subtipo semelhante às células B ativadas (ABC). Esse subtipo é caracterizado pela ativação constitutiva da via NF-κB, essencial para a sobrevivência celular. A TMD8 apresenta CARD11 do tipo selvagem, mas mantém forte atividade do NF-κB, indicando uma dependência da sinalização crônica ativa do receptor de células B (BCR). Essa dependência é corroborada por evidências experimentais que demonstram que a supressão de componentes da via do BCR — incluindo BTK, CD79A, CD79B e IgM — leva à morte celular nas células TMD8. Além disso, o TMD8 abriga uma mutação Y196H no domínio ITAM do CD79B, uma mutação comumente encontrada em ABC-DLBCLs que aumenta a expressão do BCR na superfície e atenua o feedback negativo da quinase Lyn, promovendo assim uma atividade de sinalização sustentada.

As células TMD8 também demonstram notável sensibilidade à inibição de BCL-2 por meio do venetoclax quando expressam altos níveis da proteína BCL-2. No entanto, a resistência ao venetoclax nessas células pode ser mediada pela ativação da via PI3K/AKT, particularmente após exposição prolongada ao medicamento. Esse mecanismo de resistência envolve uma redução na expressão de PTEN e aumento da fosforilação de AKT. As células TMD8 com resistência adquirida ao venetoclax apresentam maior suscetibilidade à inibição farmacológica da via PI3K/AKT, tornando-as um modelo adequado para o estudo de combinações terapêuticas destinadas a superar a resistência em linfomas agressivos de células B.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.