Mine otse sisu juurde
SF188
Kude
Aju, parem eesmine ajupoolkera
Haigus
Glioblastoom
Sünonüümid
SF-188, SF 188

Dokumendid

SF188

Cell line · Toote number 305870

Rakuliin SF188 on inimese glioblastoma multiforme’i (GBM) mudel, mis on loodud ühe lastepatsiendi põhjal. Seda kasutatakse laialdaselt, et uurida...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Kohandamine / Soovitused

Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

Rakuliin SF188 on inimese glioblastoma multiforme’i (GBM) mudel, mis on loodud ühe lastepatsiendi põhjal. Seda kasutatakse laialdaselt kemoteraapiaresistentsuse mehhanismide uurimiseks, eriti alküülivate ainete, nagu 1,3-bis(2-kloroetüül)-1-nitrosourea (BCNU) puhul. Võrreldes teiste glioomist pärinevate rakuliinidega, nagu SF126, näitab SF188 märkimisväärselt suuremat resistentsust BCNU poolt indutseeritud tsütotoksilisuse ja genotoksilisuse suhtes. Täpsemalt näitab SF188 ellujäämiskatsetes ligikaudu kolmekordset resistentsust ja 14-kordset väiksemat vastuvõtlikkust BCNU-st tingitud õekromatiidide vahetusele (SCE), mis viitab tugevale DNA-kahjustuste taluvuse fenotüübile.

SF188 resistentsust seostatakse täiustatud DNA-parandusvõimega, eriti O6-alküülguaniini aduktide kiire ja tõhusa eemaldamisega. N-metüül-N-nitrosourea-taoliste metüleerivate ainete mõjul eemaldavad SF188 rakud märkimisväärselt O6-metüülguaniini kahjustusi, samas kui tundlikumad rakuliinid näitavad minimaalset parandustegevust. See tõhus kahjustuste parandamine tõenäoliselt takistab ahelatevaheliste ristlülide teket, säilitades seeläbi genoomi terviklikkust ja suurendades rakkude ellujäämist. Oluline on ka see, et SF188-l on suur kromosoomide arv (modaalarv 91) ja puudub gliaalsete fibrillaarsete happeliste valkude (GFAP) ekspressioon, mis kinnitab selle halvasti diferentseeritud glioomi päritolu ja teeb sellest suurepärase mudeli DNA-parandamise ja kemoresistentsuse vastastikuse mõju uurimiseks kõrge astme glioomides.

Kude
Aju, parem eesmine ajupoolkera
Haigus
Glioblastoom
Sünonüümid
  • SF-188
  • SF 188

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Kahekordistumisaeg
26 tundi

04Tunnused

Viide
SF188 (Cytioni katalooginumber 305870)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_6948

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Mutatsiooniprofiil
Mutatsioon: TP53, lihtne, p.Gly266Glu (c.797G>A), homosügootne (PubMed=9614553, PubMed=10416987).

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytioni artikli number 820100a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS ja 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
2–4 × 10⁴ rakku/cm²
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
8 aastat