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SF188
Tessuto
Cervello, lobo frontale destro
Malattia
Glioblastoma
Sinonimi
SF-188, SF 188

Documenti

SF188

Cell line · Codice prodotto 305870

La linea cellulare SF188 è un modello di glioblastoma multiforme (GBM) umano derivato da un paziente pediatrico. Viene ampiamente utilizzata per studiare i meccanismi di...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare SF188 è un modello di glioblastoma multiforme (GBM) umano derivato da un paziente pediatrico. È ampiamente utilizzata per studiare i meccanismi di resistenza alla chemioterapia, in particolare agli agenti alchilanti come la 1,3-bis(2-cloroetil)-1-nitrosourea (BCNU). Rispetto ad altre linee cellulari derivate da glioma, come la SF126, la SF188 mostra una resistenza significativamente maggiore alla citotossicità e alla genotossicità indotte dal BCNU. In particolare, la linea SF188 mostra una resistenza circa tre volte maggiore nei test di sopravvivenza e una suscettibilità 14 volte inferiore allo scambio di cromatidi fratelli (SCE) indotto dal BCNU, il che indica un robusto fenotipo di tolleranza al danno al DNA.

La resistenza di SF188 è attribuita a una maggiore capacità di riparazione del DNA, in particolare alla rimozione rapida ed efficiente degli addotti O6-alchilguanina. In seguito all’esposizione ad agenti metilanti come l’N-metil-N-nitrosourea, le cellule SF188 dimostrano una marcata rimozione delle lesioni da O6-metilguanina, mentre le linee cellulari più sensibili mostrano un’attività di riparazione minima. Questa efficiente riparazione delle lesioni previene probabilmente la formazione di legami incrociati tra i filamenti, mantenendo così l’integrità genomica e aumentando la sopravvivenza cellulare. È importante sottolineare che la linea SF188 presenta anche un elevato numero cromosomico (numero modale 91) e non esprime la proteina acida fibrillare gliale (GFAP), confermando la sua origine da glioma scarsamente differenziato e rendendola un eccellente modello per lo studio dell’interazione tra riparazione del DNA e chemioresistenza nei gliomi di alto grado.

Tessuto
Cervello, lobo frontale destro
Malattia
Glioblastoma
Sinonimi
  • SF-188
  • SF 188

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Tempo di raddoppio
26 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
SF188 (codice catalogo Cytion 305870)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_6948

05Espressione e suscettibilità

Profilo mutazionale
Mutazione: TP53, semplice, p.Gly266Glu (c.797G>A), omozigote (PubMed=9614553, PubMed=10416987).

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
da 2 a 4 × 10⁴ cellule/cm²
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
8 anni