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HeLa EB3-GFP Kirc 14 27/09/24
Tissu
Col de l'utérus
Maladie
Adénocarcinome cervical (lignée HeLa) ; transfecté de manière stable avec GFP-EB3 (marqueur de l'extrémité « plus » des microtubules)

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HeLa EB3-GFP Kirc 14 27/09/24

Cell line · Référence du produit 305718

HeLa EB3-GFP Kirc 14 est un dérivé génétiquement modifié de la lignée cellulaire HeLa, issue d'un carcinome cervical humain, conçu pour exprimer de manière stable une protéine EB3 marquée par la GFP (e...

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01Informations générales

Description

HeLa EB3-GFP Kirc 14 est un dérivé génétiquement modifié de la lignée cellulaire HeLa issue d’un carcinome cervical humain, conçu pour exprimer de manière stable une construction de fusion EB3 (protéine de liaison aux extrémités 3) marquée par la GFP, avec « Kirc 14 » désignant un sous-clone spécifique (clone 14) sélectionné parmi le pool transfecté. L’EB3 fait partie de la famille des protéines de liaison aux extrémités qui suivent les extrémités « plus » des microtubules en croissance et sert de marqueur pour le comportement dynamique des microtubules dans les cellules vivantes. La protéine de fusion GFP-EB3 produit des signaux fluorescents caractéristiques en forme de comète à l’extrémité des microtubules en cours de polymérisation, permettant ainsi l’imagerie en temps réel de la dynamique des microtubules, du transport intracellulaire et de l’organisation du cytosquelette dans des cellules vivantes.

HeLa EB3-GFP Kirc 14 est utilisé en recherche en biologie cellulaire pour l’imagerie en cellules vivantes de la dynamique des extrémités « plus » des microtubules, les études sur l’assemblage du fuseau mitotique et les interactions entre les kinétochores et les microtubules, les recherches sur le transport intracellulaire de cargaisons, ainsi que l’évaluation de composés affectant la dynamique de polymérisation des microtubules. L’expression subclonale stable de GFP-EB3 garantit une intensité et un profil de fluorescence constants d’un passage à l’autre, ce qui rend le clone 14 adapté aux tests d’imagerie quantitative et au criblage à haut débit d’agents ciblant les microtubules.

Tissu
Col de l'utérus
Maladie
Adénocarcinome cervical (lignée HeLa) ; transfecté de manière stable avec GFP-EB3 (marqueur de l'extrémité « plus » des microtubules)
Applications
Imagerie de la dynamique des microtubules dans des cellules vivantes ; études sur le fuseau mitotique ; recherche sur les interactions entre les kinétochores et les microtubules ; transport intracellulaire ; criblage de médicaments ciblant les microtubules

02Classification

Organisme
Humain
Propriétés de croissance
Adepte
Statut OGM
GMO-S1
Informations détaillées sur le statut OGM
GMO-S1: This HeLa EB3 GFP KIRC14 line contains a GFP-tagged EB3 construct for microtubule plus-end tracking in live-cell imaging. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Niveau de biosécurité
1

03Caractéristiques

Morphologie
De type épithélial
Type de cellule
Cellules épithéliales
Temps de doublement
environ 24 heures

04Identifiants

Référence
HeLa EB3-GFP Kirc 14 27/09/24 (référence Cytion 305718)
Numéro d'identification fiscale NCBI
9606

05Manipulation et culture

Milieu de culture
DMEM, w : 4.5 g/L Glucose, w : 4 mM L-Glutamine, w : 3.7 g/L NaHCO3, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium (numéro d'article Cytion 820300a)
Atmosphère d'incubation

37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.

Compléments alimentaires
Compléter le milieu avec 10% de FBS
Réactif de dissociation
Accutase, 10 min, 37 °C
Repiquage
Retirez l'ancien milieu des cellules adhérentes et lavez-les avec du PBS. Recouvrez-les d'Accutase, incubez à température ambiante pendant 8 à 10 minutes, remettez-les en suspension dans du milieu, centrifugez à 300 × g pendant 3 minutes, puis transférez-les dans des flacons neufs contenant du milieu de sélection.
Rapport de fractionnement
1 à 5
Densité de semis
1 à 3 × 10⁴ cellules/cm²
Renouvellement des fluides
2 à 3 fois par semaine
Décongélation et mise en culture
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Contrôle qualité et cryoconservation

Milieu de congélation
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet + 10 % de DMSO pour assurer une viabilité adéquate après décongélation.
Conditions de stockage

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Conditions de livraison

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.