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HeLa EB3-GFP Kirc 14 27/09/24
Tessuto
Cervice
Malattia
Adenocarcinoma cervicale (di origine HeLa); trasfettato in modo stabile con GFP-EB3 (reporter dell'estremità positiva dei microtubuli)

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HeLa EB3-GFP Kirc 14 27/09/24

Cell line · Codice prodotto 305718

HeLa EB3-GFP Kirc 14 è un derivato geneticamente modificato della linea cellulare umana HeLa, derivata dal carcinoma cervicale, progettato per esprimere in modo stabile una proteina EB3 marcata con GFP (e...

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01Informazioni generali

Descrizione

HeLa EB3-GFP Kirc 14 è un derivato geneticamente modificato della linea cellulare umana HeLa, derivata dal carcinoma cervicale, ingegnerizzata per esprimere in modo stabile un costrutto di fusione EB3 (end-binding protein 3) marcato con GFP, con "Kirc 14" indica uno specifico sottoclone (clone 14) selezionato dal pool trasfettato. L’EB3 appartiene alla famiglia delle proteine di legame terminale che seguono le estremità positive dei microtubuli in crescita e funge da indicatore del comportamento dinamico dei microtubuli nelle cellule vive. La proteina di fusione GFP-EB3 produce caratteristici segnali fluorescenti simili a comete alle estremità dei microtubuli in fase di polimerizzazione, consentendo l’imaging in tempo reale delle dinamiche dei microtubuli, del trasporto intracellulare e dell’organizzazione del citoscheletro nelle cellule vive.

HeLa EB3-GFP Kirc 14 viene utilizzato nella ricerca di biologia cellulare per l’imaging su cellule vive delle dinamiche delle estremità positive dei microtubuli, per studi sull’assemblaggio del fuso mitotico e sulle interazioni tra cinetocori e microtubuli, per indagini sul trasporto intracellulare di carichi e per la valutazione di composti che influenzano le dinamiche di polimerizzazione dei microtubuli. L’espressione subclonale stabile di GFP-EB3 garantisce un’intensità e un pattern di fluorescenza costanti nel corso dei passaggi, rendendo il clone 14 adatto a test di imaging quantitativo e allo screening ad alta produttività di agenti mirati ai microtubuli.

Tessuto
Cervice
Malattia
Adenocarcinoma cervicale (di origine HeLa); trasfettato in modo stabile con GFP-EB3 (reporter dell'estremità positiva dei microtubuli)
Applicazioni
Immagistica della dinamica dei microtubuli nelle cellule vive; studi sul fuso mitotico; ricerca sull’interazione tra cinetocori e microtubuli; trasporto intracellulare; screening di farmaci mirati ai microtubuli

02Classificazione

Organismo
Umano
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This HeLa EB3 GFP KIRC14 line contains a GFP-tagged EB3 construct for microtubule plus-end tracking in live-cell imaging. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Cellule epiteliali
Tempo di raddoppio
circa 24 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HeLa EB3-GFP Kirc 14 27/09/24 (codice catalogo Cytion 305718)
Codice fiscale NCBI
9606

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase, 10 min., 37 °C
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno di coltura dalle cellule aderenti e lavarle con PBS. Coprire con Accutase, incubare a temperatura ambiente per 8-10 minuti, risospendere nel terreno di coltura, centrifugare a 300×g per 3 minuti e trasferire in fiasche nuove contenenti terreno di selezione.
Rapporto di frazionamento
Da 1 a 5
Densità di semina
da 1 a 3 × 10⁴ cellule/cm²
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Controllo di qualità e crioconservazione

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo + 10% DMSO per ottenere un'adeguata vitalità post-scongelamento.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.