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HeLa EB3-GFP Kirc 14 27/09/24
Tecido
Colo do útero
Doença
Adenocarcinoma cervical (de origem HeLa); transfectado de forma estável com GFP-EB3 (reportero da extremidade positiva dos microtúbulos)

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HeLa EB3-GFP Kirc 14 27/09/24

Cell line · Número do produto 305718

A HeLa EB3-GFP Kirc 14 é um derivado geneticamente modificado da linha celular humana HeLa, proveniente de um carcinoma cervical, concebido para expressar de forma estável uma proteína EB3 marcada com GFP (e...

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01Informações gerais

Descrição

A HeLa EB3-GFP Kirc 14 é um derivado geneticamente modificado da linha celular humana HeLa de carcinoma cervical, concebida para expressar de forma estável uma construção de fusão de EB3 (proteína de ligação terminal 3) marcada com GFP, com «Kirc 14» a designar um subclone específico (clone 14) selecionado do conjunto de células transfectadas. A EB3 é um membro da família das proteínas de ligação às extremidades que acompanha as extremidades positivas dos microtúbulos em crescimento e serve como marcador do comportamento dinâmico dos microtúbulos em células vivas. A proteína de fusão GFP-EB3 produz sinais fluorescentes característicos, semelhantes a cometas, nas pontas dos microtúbulos em polimerização, permitindo a obtenção de imagens em tempo real da dinâmica dos microtúbulos, do transporte intracelular e da organização do citoesqueleto em células vivas.

O HeLa EB3-GFP Kirc 14 é utilizado na investigação em biologia celular para a obtenção de imagens em células vivas da dinâmica das extremidades positivas dos microtúbulos, estudos sobre a montagem do fuso mitótico e as interações entre o cinetocoro e os microtúbulos, investigações sobre o transporte intracelular de carga e avaliação de compostos que afetam a dinâmica da polimerização dos microtúbulos. A expressão subclonal estável de GFP-EB3 proporciona uma intensidade e um padrão de fluorescência consistentes ao longo das passagens, tornando o clone 14 adequado para ensaios de imagem quantitativa e triagem de alto rendimento de agentes que têm como alvo os microtúbulos.

Tecido
Colo do útero
Doença
Adenocarcinoma cervical (de origem HeLa); transfectado de forma estável com GFP-EB3 (reportero da extremidade positiva dos microtúbulos)
Aplicações
Imagiologia da dinâmica dos microtúbulos em células vivas; estudos do fuso mitótico; investigação sobre a interação entre o cinetocoro e os microtúbulos; transporte intracelular; triagem de fármacos direcionados aos microtúbulos

02Classificação

Organismo
Humano
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This HeLa EB3 GFP KIRC14 line contains a GFP-tagged EB3 construct for microtubule plus-end tracking in live-cell imaging. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Células epiteliais
Tempo de duplicação
cerca de 24 horas

04Identificadores

Referência
HeLa EB3-GFP Kirc 14 27/09/24 (número de catálogo da Cytion 305718)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase, 10 min., 37 °C
Subcultura
Retire o meio antigo das células aderentes e lave-as com PBS. Cubra com Accutase, incube à temperatura ambiente durante 8 a 10 minutos, ressuspenda com meio, centrifugue a 300×g durante 3 minutos e transfira para frascos novos com meio de seleção.
Rácio de divisão
1 a 5
Densidade de sementeira
1 a 3 × 10⁴ células/cm²
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Controlo de qualidade e criopreservação

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo + 10% de DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.