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HeLa EB3-GFP Kirc 14 27.09.24
Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Zervikales Adenokarzinom (HeLa-Hintergrund); stabil mit GFP-EB3 transfiziert (Reporter für das Plus-Ende der Mikrotubuli)

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HeLa EB3-GFP Kirc 14 27.09.24

Cell line · Artikelnummer 305718

HeLa EB3-GFP Kirc 14 ist ein genetisch verändertes Derivat der menschlichen HeLa-Zelllinie aus Gebärmutterhalskrebs, das so konstruiert wurde, dass es stabil ein GFP-markiertes EB3 exprimiert (e...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

HeLa EB3-GFP Kirc 14 ist ein genetisch modifiziertes Derivat der menschlichen HeLa-Zelllinie aus Gebärmutterhalskrebs, das so konstruiert wurde, dass es stabil ein GFP-markiertes EB3-Fusionskonstrukt (End-Binding-Protein 3) exprimiert, wobei wobei „Kirc 14“ einen spezifischen Subklon (Klon 14) bezeichnet, der aus dem transfizierten Pool ausgewählt wurde. EB3 gehört zur Familie der End-Binding-Proteine, die den Plus-Enden wachsender Mikrotubuli folgen und als Reporter für das dynamische Verhalten von Mikrotubuli in lebenden Zellen dienen. Das GFP-EB3-Fusionsprotein erzeugt charakteristische, kometenartige Fluoreszenzsignale an den Spitzen polymerisierender Mikrotubuli und ermöglicht so die Live-Zell-Bildgebung der Mikrotubuli-Dynamik, des intrazellulären Transports und der Organisation des Zytoskeletts in Echtzeit.

HeLa EB3-GFP Kirc 14 wird in der zellbiologischen Forschung für die Live-Zell-Bildgebung der Dynamik der Plus-Enden von Mikrotubuli, für Untersuchungen zum Aufbau der Mitosespindel und zu Kinetochor-Mikrotubuli-Wechselwirkungen, für Untersuchungen zum intrazellulären Frachttransport sowie zur Bewertung von Verbindungen, die die Polymerisationsdynamik von Mikrotubuli beeinflussen, verwendet. Die stabile subklonale GFP-EB3-Expression sorgt für eine über alle Passagen hinweg gleichbleibende Fluoreszenzintensität und -verteilung, wodurch sich Klon 14 für quantitative Bildgebungsassays und das Hochdurchsatz-Screening von Wirkstoffen mit Mikrotubuli als Ziel eignet.

Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Zervikales Adenokarzinom (HeLa-Hintergrund); stabil mit GFP-EB3 transfiziert (Reporter für das Plus-Ende der Mikrotubuli)
Anwendungen
Bildgebung der Mikrotubuli-Dynamik in lebenden Zellen; Untersuchungen zur Mitosespindel; Forschung zur Wechselwirkung zwischen Kinetochoren und Mikrotubuli; intrazellulärer Transport; Screening von Wirkstoffen, die auf Mikrotubuli abzielen

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This HeLa EB3 GFP KIRC14 line contains a GFP-tagged EB3 construct for microtubule plus-end tracking in live-cell imaging. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Zelltyp
Epithelzellen
Verdopplungszeit
ca. 24 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
HeLa EB3-GFP Kirc 14 27.09.24 (Cytion-Katalognummer 305718)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
Derived from HeLa (CVCL_0030); GFP-EB3 sub-clone not independently assigned

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase, 10 Min., 37 °C
Subkultivierung
Das alte Medium von den anhaftenden Zellen entfernen und mit PBS waschen. Mit Accutase bedecken, bei Raumtemperatur 8–10 Minuten inkubieren, mit Medium resuspendieren, 3 Minuten bei 300×g zentrifugieren und in frische Flaschen mit Selektionsmedium überführen.
Split-Verhältnis
1 bis 5
Aussaatdichte
1 bis 3 × 10⁴ Zellen/cm²
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir vollständiges Wachstumsmedium + 10 % DMSO, um eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen zu gewährleisten.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.