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C127
Tessuto
Ghiandola mammaria
Malattia
Neoplasie maligne della ghiandola mammaria di topo
Sinonimi
C-127

Documenti

C127

Cell line · Codice prodotto 305169

Le cellule C127, provenienti da tessuti epiteliali mammari murini, costituiscono una linea cellulare mammifera indispensabile che fornisce una solida base per una moltitudine di...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule C127, provenienti da tessuti epiteliali mammari murini, sono una linea cellulare di mammifero indispensabile che pone solide basi per una moltitudine di studi biologici. Queste cellule sono state sottoposte a un rigoroso processo di ingegnerizzazione, che prevede l'infezione con virus specificamente progettati per integrare nel loro genoma la RNA polimerasi T7 guidata da un promotore virale. La flessibilità delle cellule C127 è ulteriormente migliorata dall'introduzione di un ulteriore virus ricombinante che trasporta il cDNA del regolatore della conduttanza transmembrana della fibrosi cistica (CFTR) sotto il controllo di un promotore T7 o, in alternativa, di un plasmide trasfettato con lo stesso promotore. Questo assetto genetico consente un controllo preciso dell'espressione proteica, adattato alla produzione di proteine specifiche, rendendo così le cellule C127 uno strumento eccezionale per gli studi sull'espressione proteica.

La natura epiteliale delle cellule C127, che riflette la loro derivazione dai tessuti della ghiandola mammaria, ne favorisce la crescita in modo aderente. Esse mostrano una rapida proliferazione e possono essere utilizzate per esaminare i processi cellulari, la crescita e la differenziazione in diverse condizioni sperimentali. Le modifiche genetiche uniche presenti in queste cellule le rendono un modello ideale per esperimenti di trasfezione cellulare stabile, consentendo ai ricercatori di inserire materiale genetico estraneo e di esplorare le funzioni geniche, le interazioni proteiche e le conseguenze delle modifiche genetiche. Inoltre, il loro uso nella coltura cellulare 3D è stato sempre più riconosciuto, fornendo approfondimenti sulle interazioni cellula-cellula, sulla morfogenesi dei tessuti e sulla modellazione delle malattie con una maggiore rilevanza fisiologica, estendendo così la loro utilità oltre le tradizionali colture 2D.

Tessuto
Ghiandola mammaria
Malattia
Neoplasie maligne della ghiandola mammaria di topo
Sinonimi
  • C-127

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale

04Identificatori

Riferimento bibliografico
C127 (numero di catalogo Cytion 305169)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_6550

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Razza / sottospecie
RIII