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NRK-IBB-DiHcRed1
Tessuto
Rene
Sinonimi
NRK IBB-DiHcRed1

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NRK-IBB-DiHcRed1

Cell line · Codice prodotto 500671

NRK-IBB-DiHcRed1 è una linea cellulare modificata derivata da cellule renali normali di ratto (NRK), ingegnerizzata per esprimere la proteina fluorescente rossa DiHcRed1. Questa modifica...

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01Informazioni generali

Descrizione

NRK-IBB-DiHcRed1 è una linea cellulare modificata derivata da cellule di rene normale di ratto (NRK), ingegnerizzata per esprimere la proteina rossa fluorescente DiHcRed1. Questa modifica consente ai ricercatori di seguire e visualizzare i processi cellulari in tempo reale utilizzando la microscopia a fluorescenza. La fluorescenza rossa stabile è ideale per l'imaging di cellule vive, facilitando gli studi sulla migrazione, la divisione e la morfologia delle cellule.

La linea cellulare mantiene le caratteristiche tipiche delle cellule NRK, tra cui la morfologia simile a quella epiteliale e la normale proliferazione, che la rendono un modello affidabile per lo studio del comportamento delle cellule di mammifero. La fluorescenza rossa consente inoltre il multiplexing con altri marcatori, migliorandone l'uso nella biologia cellulare, nella ricerca sul cancro e nello screening dei farmaci.

Tessuto
Rene
Sinonimi
  • NRK IBB-DiHcRed1

02Classificazione

Organismo
Ratto
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Cellule simili a fibroblasti con forma fusiforme

04Identificatori

Riferimento bibliografico
NRK-IBB-DiHcRed1 (numero di catalogo Cytion 500671)
Codice fiscale NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_AV95
Depositario
Il laboratorio Ellenberg (EMBL)

05Espressione e suscettibilità

Recettori espressi
Fattore di crescita epidermico (EGF), attività stimolante la moltiplicazione (MSA)
Espressione proteica
IBB-DiHcRed1: Posizione/gene: 1..589 / Pcmv, 656..916 / IBB, 932..1615 , 1670..2356 / HcRed1, 3587..4381 / KanR/NeoR
Prodotti
CMV Promotor IBB (Ribbeck & Gorlich 2002), Neomicina, Fosfotransferasi, Fattore di crescita epidermico, Attività di stimolo alla moltiplicazione

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con 10% FBS, 0,5 mg/mL G418
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Eliminare il vecchio terreno e lavare le cellule con PBS. Aggiungere una soluzione di tripsina 0,025%/0,02% EDTA appena preparata e riscaldata a 37 gradi Celsius e attendere che le cellule si stacchino, il che di solito richiede circa 5 minuti. Neutralizzare la tripsina aggiungendo terreno fresco, quindi trasferire la miscela di cellule in una provetta e centrifugare. Dopo la centrifugazione, rimuovere il surnatante, risospendere il pellet di cellule in terreno di coltura fresco e trasferire la sospensione in nuove fiasche. Incorporare G418 nel terreno di coltura per ottenere una concentrazione finale di 0,5 mg/ml
Densità di semina
Da 2 a 4 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
OsborneMendel