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L6565
Tessuto
Sangue periferico

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L6565

Cell line · Codice prodotto 305189

Le cellule L6565 sono state ottenute da sospensioni pancreatiche di splenociti provenienti da topi affetti da leucemia L6565. Il numero dei cromosomi variava da 38 a 144. Al microscopio elettronico...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule L6565 sono state derivate da sospensioni pancreatiche di splenociti di topi leucemici L6565. La conta cromosomica variava da 38 a 144. Le osservazioni al microscopio elettronico hanno rivelato che le cellule clonali L6565 avevano nuclei ben definiti e un'abbondanza di organelli e particelle virali di classe A e C nel citoplasma. Gli oncogeni c-myc e c-fos erano sovraespressi in queste cellule. Il clone cellulare L6565 è una linea cellulare staminale di leucemia linfoblastica contenente virus a RNA. Ha superato il test di rilevamento del micoplasma in questa libreria.

L'importanza della linea cellulare L6565 risiede nel fatto che fornisce risorse cellulari sperimentali standardizzate e il relativo supporto tecnico per la ricerca nei settori delle scienze della vita e delle biotecnologie. Queste cellule possono essere fondamentali per comprendere i meccanismi molecolari della leucemia, in particolare il ruolo delle particelle virali e dell'espressione degli oncogeni nella leucemogenesi. Inoltre, sono uno strumento prezioso per la sperimentazione e lo sviluppo di farmaci, consentendo ai ricercatori di esplorare potenziali strategie terapeutiche per la leucemia e altri disturbi correlati

Tessuto
Sangue periferico

02Classificazione

Organismo
Mouse
Proprietà di crescita
Aderente e in sospensione
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Linfoblasto

04Identificatori

Riferimento bibliografico
L6565 (numero di catalogo Cytion 305189)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_A9NB

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con 10% FBS, 0,005 mg/mL di insulina, 0,01 mg/mL di transferrina umana, 0,1 mM di etanolamina, 0,1 mM di fosfoetanolamina, 25 nM di selenio, 500 nM di idrocortisone, 0,005 mM di forskolina, estratto di ipofisi bovina (0,15 mg di proteine per ml)
Subcoltura
Omogeneizzare delicatamente la sospensione cellulare nel pallone pipettando verso l'alto e verso il basso, quindi prelevare un campione rappresentativo per determinare la densità cellulare per ml. Diluire la sospensione per ottenere una concentrazione cellulare di 5 x 105 cellule/ml con terreno di coltura fresco e aliquotare la sospensione regolata in nuovi palloni per l'ulteriore coltivazione.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.