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Hela 229
Tessuto
Cervice
Malattia
Adenocarcinoma endocervicale legato al papillomavirus umano
Sinonimi
HeLa-229, HeLa229

Documenti

Hela 229

Cell line · Codice prodotto 305056

The HeLa 229 cell line is a clonal derivative of the original HeLa cell line, which was the first human cell line to be continuously cultured. HeLa cells ...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare HeLa 229 è un derivato clonale della linea cellulare HeLa originale, che è stata la prima linea cellulare umana ad essere coltivata in modo continuo. Le cellule HeLa sono state derivate da cellule di cancro cervicale prelevate da Henrietta Lacks nel 1951. La sublinea HeLa 229 è utilizzata in diverse aree della ricerca biomedica, tra cui la ricerca sul cancro, lo sviluppo di farmaci e la tossicologia, grazie alla sua robusta crescita e adattabilità in condizioni di laboratorio.

Una delle caratteristiche principali della linea cellulare HeLa 229 è la sua crescita e proliferazione aggressiva, che riflette l'origine cancerosa delle cellule. Ciò la rende particolarmente utile per gli studi che richiedono un'elevata produzione di cellule e una crescita rapida, come lo screening high-throughput per la scoperta di farmaci. Le cellule HeLa 229 sono anche altamente adattabili alla manipolazione genetica, consentendo ai ricercatori di introdurre geni estranei o mutazioni specifiche per studiarne gli effetti sul comportamento e sulla patologia cellulare.

Le cellule HeLa 229 continuano a essere un modello fondamentale in virologia, poiché sono sensibili a un'ampia varietà di virus. Questa suscettibilità le rende uno strumento eccellente per lo studio dei cicli vitali virali, delle interazioni ospite-virus e dell'efficacia dei composti antivirali. Questa linea cellulare è stata anche determinante per la comprensione di processi cellulari fondamentali, come la replicazione del DNA, la trascrizione e l'apoptosi.

Nonostante la loro utilità, l'uso delle cellule HeLa, compresa la linea HeLa 229, solleva considerazioni etiche riguardo al consenso e alle origini della linea cellulare, poiché le cellule sono state originariamente ottenute senza il consenso di Henrietta Lacks o della sua famiglia. Tuttavia, la ricerca in corso con le cellule HeLa continua a contribuire in modo significativo alla scienza, grazie alle loro caratteristiche uniche e alla loro importanza storica nello sviluppo della moderna biologia cellulare.

Tessuto
Cervice
Malattia
Adenocarcinoma endocervicale legato al papillomavirus umano
Sinonimi
  • HeLa-229
  • HeLa229

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale
Tempo di raddoppio
26 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Hela 229 (numero di catalogo Cytion 305056)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1276

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con 10% FBS, 1% NEAA e 1,0 mM di piruvato di sodio
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
31 anni