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HT55
Tessuto
Retto
Malattia
Adenocarcinoma
Sinonimi
HT55

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HT55

Cell line · Codice prodotto 305018

HT55 is a human rectal adenocarcinoma cell line established from the primary rectal tumor of a 54-year-old Caucasian female. The line grows as an adherent...

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01Informazioni generali

Descrizione

HT55 è una linea cellulare di adenocarcinoma rettale umano ottenuta da un tumore rettale primario di una donna caucasica di 54 anni. La linea cresce sotto forma di monostrato aderente con morfologia di tipo epiteliale. HT55 presenta molteplici mutazioni eterozigoti e omozigoti con perdita di funzione nel gene oncosoppressore APC (adenomatous polyposis coli), tra cui p.Gln1131Ter, p.Gln1303Ter, p.Arg1463Ser, p.Asn581Tyr e p.Lys241Ter (tutte eterozigoti), oltre a una sostituzione omozigote p.Arg213Leu. Questo profilo mutazionale rende HT55 un modello biologicamente rilevante della carcinogenesi colorettale guidata dall’APC, riflettendo la disregolazione della via WNT canonica che è alla base della maggior parte dei tumori colorettali umani.

HT55 è ampiamente utilizzata nella ricerca sul carcinoma colorettale per studi sulla segnalazione WNT/β-catenina, sulla funzione del soppressore tumorale APC, sulla sensibilità e resistenza ai farmaci e sulla valutazione preclinica di agenti mirati contro i componenti della via di segnalazione WNT. La linea è adatta per saggi farmacologici in vitro e studi su xenotrapianti in modelli murini immunocompromessi, fornendo una piattaforma in vitro aderente e maneggevole per la ricerca meccanicistica e traslazionale sul cancro del colon-retto. La presenza di molteplici mutazioni da troncamento del gene APC rende la linea HT55 rappresentativa del sottotipo di tumore del colon-retto microsatellite-stabile e cromosomicamente instabile, comunemente causato dalla perdita di funzione di APC.

Tessuto
Retto
Malattia
Adenocarcinoma
Applicazioni
Ricerca sul cancro del colon-retto; studi sulla via di segnalazione WNT/APC; test di sensibilità e resistenza ai farmaci; oncologia preclinica; modelli di xenotrapianto; valutazione delle terapie mirate
Sinonimi
  • HT55

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Cellule epiteliali
Tempo di raddoppio
28 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HT55 (codice Cytion 305018)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1294

05Espressione e suscettibilità

Profilo mutazionale
Mutazione: p.Gln1131Ter, eterozigote; Mutazione: p.Gln1303Ter, eterozigote; Mutazione: p.Arg1463Ser, eterozigote; Mutazione: p.Asn581Tyr, eterozigote; Mutazione: p.Lys241Ter, eterozigote; Mutazione: p.Arg213Leu, omozigote

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno di coltura dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS, mentre per le fiasche T75 utilizzare 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per quelle T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per distaccarle. Dopo l’incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno di coltura per risospenderle, quindi centrifugare a 300×g per 3 minuti. Eliminare il surnatante, risospendere le cellule in terreno di coltura fresco e trasferirle in nuove fiasche che contengano già terreno di coltura fresco.
Rapporto di frazionamento
Da 1 a 5
Densità di semina
Da 1 a 3 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
Ogni 2 o 3 giorni
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
54 anni
Etnia
Caucasico