Ga naar de inhoud
HROC222 T1 M2
Weefsel
Dwarse dikke darm
Ziekte
Adenocarcinoom
Plaats van uitzaaiingen
Niet van toepassing (primaire tumor in de transversale colon; T1 M2 verwijst naar het eerste chirurgische tijdstip, in-vitro-model 2)

Documenten

HROC222 T1 M2

Cell line · Productnummer 300859

HROC222 T1 M2 is een menselijke celijn van colorectaal adenocarcinoom die is opgezet binnen de HROC-modelcollectie (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer) op basis van een pr...

€800.00excl. btw en verzendkosten
Op bestelling gemaakt
1

01Algemene informatie

Beschrijving

HROC222 T1 M2 is een menselijke colorectale adenocarcinoomcellijn die is opgezet binnen de HROC-modelcollectie (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer) op basis van een primaire tumor die bij een volwassen patiënt is verwijderd. De aanduiding "T1" geeft aan dat het monster werd verkregen tijdens de eerste chirurgische ingreep, terwijl "M2" verwijst naar het overeenkomstige in-vitromodel dat uit deze tumor werd gegenereerd. Het HROC-platform integreert uitgebreide biobanking, gestandaardiseerde moleculaire annotatie en parallelle oprichting van van patiënten afkomstige xenotransplantaten (PDX) en permanente cellijnen met een laag aantal passages, waardoor klinisch geannoteerde translationele onderzoeksmodellen mogelijk worden.

De generatie van HROC222 T1 M2 volgde gestandaardiseerde procedures, waaronder mechanische dissociatie van vers verwijderd tumorweefsel, bereiding van suspensies van afzonderlijke cellen en zaaien op met collageen gecoate kweekplaten in een gedefinieerd tumorcelkweekmedium aangevuld met glutamine, antibiotica en antimycotica. In het HROC-cohort werden met succes permanente primaire colorectale kankercellijnen opgezet uit ongeveer 13% van de geprobeerde monsters. Statistische analyse wees uit dat een hogere tumorgraad significant geassocieerd was met het succesvol opzetten van primaire cellijnen, terwijl een gevorderde lymfeklierstatus een positieve trend vertoonde. In multivariate analyse van de hele collectie bleek lymfeklierbetrokkenheid een onafhankelijke voorspeller te zijn voor het succes van het opzetten van modellen.

De HROC-collectie omvat alle belangrijke moleculaire subtypes van colorectaal carcinoom, waaronder chromosomale instabiliteit (CIN), CpG-eilandmethylatorfenotype (CIMP), microsatellietstabiele (MSS) en microsatellietinstabiliteit-hoge (MSI-H) tumoren, evenals diverse mutatieachtergronden die van invloed zijn op belangrijke drivergenen zoals KRAS, BRAF, TP53, APC en PIK3CA. HROC222 T1 M2 is gegenereerd binnen dit rigoureus gekarakteriseerde kader, waardoor integratie met gedetailleerde klinisch-pathologische en moleculaire gegevens en, indien beschikbaar, overeenkomstig PDX-materiaal mogelijk is. Als een laag-passage, van patiënten afkomstig colorectaal carcinoommodel is HROC222 T1 M2 geschikt voor onderzoek naar tumorbiologie, genotype-fenotype relaties en preklinische therapeutische tests binnen precisie-oncologisch onderzoek.

Weefsel
Dwarse dikke darm
Ziekte
Adenocarcinoom
Plaats van uitzaaiingen
Niet van toepassing (primaire tumor in de transversale colon; T1 M2 verwijst naar het eerste chirurgische tijdstip, in-vitro-model 2)
Toepassingen
CRC-onderzoek; colorectaal adenocarcinoom; HROC Linnebacher-biobank; geneesmiddelgevoeligheid; tumorbiologie; integratie van PDX en in-vitro-onderzoek

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Man
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
Zonder genetisch gemodificeerde organismen
Details over de GGO-status
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line (HROC Linnebacher biobank).
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Celtype
Epitheelcellen

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HROC222 T1 M2 (Cytion catalogusnummer 300859)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_VQ93

05Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Vloeistofverversing
Om de 3 tot 5 dagen
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

07Donateur

Leeftijd van de donor
79 jaar
Etnische afkomst
Kaukasisch