Mine otse sisu juurde
HROC222 T1 M2
Kude
Transversaalne käärsoolestik
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Ei kohaldata (primaarne ristkoloni kasvaja; T1 M2 tähistab esimest kirurgilist ajapunkti, in vitro mudel 2)

Dokumendid

HROC222 T1 M2

Cell line · Toote number 300859

HROC222 T1 M2 on inimese kolorektaalse adenokartsinoomi rakuliin, mis on loodud HROC (Hansestadt Rostocki kolorektaalvähi) mudelikogus proovist...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HROC222 T1 M2 on inimese kolorektaalne adenokartsinoomi rakuliin, mis on loodud HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer) mudelikogus täiskasvanud patsiendilt eemaldatud primaarse kasvaja põhjal. Tähis „T1” näitab, et proov võeti esimese operatsiooni ajal, „M2” tähistab aga sellest kasvajast loodud vastavat in vitro mudelit. HROC platvorm ühendab endas tervikliku biopanga, standardiseeritud molekulaarse annotatsiooni ning patsiendilt saadud ksenotransplantaatide (PDX) ja püsivate madala passaažiga rakuliinide paralleelse loomise, võimaldades kliiniliselt annotatsioonidega translaatsioonilisi uurimismudeleid.

HROC222 T1 M2 loomine toimus standardiseeritud protseduuri järgi, mis hõlmas värskelt eemaldatud kasvajakoest mehaanilist dissotsiatsiooni, üherakuliste suspensioonide valmistamist ja külvamist kollageeniga kaetud kultuurplaatidele määratletud kasvajarakkude kultuurikeskkonnas, millele oli lisatud glutamiini, antibiootikume ja antimükotikaid. Kogu HROC-kohordi ulatuses loodi püsivad primaarse kolorektaalse vähi rakuliinid edukalt ligikaudu 13% proovitud proovidest. Statistiline analüüs tuvastas, et kõrgem kasvaja klassifikatsioon oli oluliselt seotud edukate primaarse rakuliini loomisega, samas kui kaugelearenenud lümfisõlmede seisund näitas positiivset suundumust. Kogu kogumit hõlmavas mitme muutuja analüüsis ilmnes lümfisõlmede kaasatus kui sõltumatu ennustaja mudeli loomise edukuse kohta.

HROC-kogu hõlmab kõiki peamisi kolorektaalse kartsinoomi molekulaarseid alatüüpe, sealhulgas kromosoomide ebastabiilsust (CIN), CpG-saarte metülatsioonifenotüüpi (CIMP), mikrosatelliitide stabiilsust (MSS) ja mikrosatelliitide kõrget ebastabiilsust (MSI-H) ning mitmesuguseid mutatsioonilisi taustu, mis mõjutavad peamisi draivergeene, nagu KRAS, BRAF, TP53, APC ja PIK3CA. HROC222 T1 M2 loodi selle rangelt iseloomustatud raamistiku piires, mis võimaldab integreerida üksikasjalikke kliinilis-patoloogilisi ja molekulaarseid andmeid ning, kui need on kättesaadavad, vastavat PDX-materjali. Madala passaažiga, patsientidelt saadud kolorektaalse kartsinoomi mudelina sobib HROC222 T1 M2 kasvaja bioloogia, genotüübi-fenotüübi suhete ja prekliiniliste terapeutiliste katsete uurimiseks täppisonkoloogia uuringutes.

Kude
Transversaalne käärsoolestik
Haigus
Adenokartsinoom
Metastaaside asukoht
Ei kohaldata (primaarne ristkoloni kasvaja; T1 M2 tähistab esimest kirurgilist ajapunkti, in vitro mudel 2)
Rakendused
CRC-uuringud; kolorektaalne adenokartsinoom; HROC Linnebacher’i biopank; ravimite tundlikkus; kasvaja bioloogia; PDX-in vitro integratsioon

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-vaba
GMO-staatuse üksikasjad
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line (HROC Linnebacher biobank).
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Rakutüüp
Epiteelirakud

04Tunnused

Viide
HROC222 T1 M2 (Cytioni katalooginumber 300859)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_VQ93

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
Iga 3 kuni 5 päeva tagant
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
79 aastat
Etniline kuuluvus
Kaukaasia