Přejít na obsah
HROC222 T1 M2
Tkáň
Příčný tračník
Nemoc
Adenokarcinom
Místo metastázy
Neplatí (primární nádor příčného tlustého střeva; T1 M2 označuje první chirurgický časový bod, in vitro model 2)

Dokumenty

HROC222 T1 M2

Cell line · Číslo výrobku 300859

HROC222 T1 M2 je lidská buněčná linie adenokarcinomu tlustého střeva a konečníku, která byla vytvořena v rámci modelové sbírky HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer) z...

€800.00bez DPH a poštovného
Na zakázku
1

01Obecné informace

Popis

HROC222 T1 M2 je lidská buněčná linie adenokarcinomu tlustého střeva a konečníku vytvořená v rámci modelové sbírky HROC (Hansestadt Rostock Colorectal Cancer) z primárního nádoru resekovaného u dospělého pacienta. Označení „T1“ znamená, že vzorek byl získán při prvním chirurgickém zákroku, zatímco „M2“ označuje odpovídající in vitro model vytvořený z tohoto nádoru. Platforma HROC integruje komplexní biobanking, standardizované molekulární anotace a paralelní vytvoření xenotransplantátů odvozených od pacientů (PDX) a trvalých buněčných linií s nízkým počtem pasáží, což umožňuje klinicky anotované translační výzkumné modely.

Generování HROC222 T1 M2 proběhlo podle standardizovaných postupů zahrnujících mechanickou disociaci čerstvě resekované nádorové tkáně, přípravu suspenzí jednotlivých buněk a výsev na kolagenem potažené kultivační destičky v definovaném kultivačním médiu nádorových buněk doplněném glutaminem, antibiotiky a antimykotiky. V celé kohortě HROC byly úspěšně vytvořeny trvalé primární buněčné linie kolorektálního karcinomu z přibližně 13 % zkoumaných vzorků. Statistická analýza identifikovala vyšší stupeň nádoru jako významně asociovaný s úspěšným vytvořením primární buněčné linie, zatímco pokročilý stav uzlin vykazoval pozitivní trend. V multivariantní analýze celé sbírky se zapojení uzlin ukázalo jako nezávislý prediktor úspěchu vytvoření modelu.

Kolekce HROC zahrnuje všechny hlavní molekulární podtypy kolorektálního karcinomu, včetně chromozomální nestability (CIN), fenotypu metylátoru CpG ostrovů (CIMP), mikrosatelitové stability (MSS) a mikrosatelitové nestability s vysokou mírou (MSI-H), jakož i různorodé mutační pozadí ovlivňující klíčové geny, jako jsou KRAS, BRAF, TP53, APC a PIK3CA. HROC222 T1 M2 byl vytvořen v rámci tohoto přísně charakterizovaného rámce, což umožňuje integraci s podrobnými klinicko-patologickými a molekulárními údaji a, pokud jsou k dispozici, s odpovídajícím PDX materiálem. Jako model kolorektálního karcinomu s nízkým počtem pasáží odvozený od pacienta je HROC222 T1 M2 vhodný pro výzkum biologie nádorů, vztahů mezi genotypem a fenotypem a preklinické terapeutické testování v rámci přesné onkologické výzkumu.

Tkáň
Příčný tračník
Nemoc
Adenokarcinom
Místo metastázy
Neplatí (primární nádor příčného tlustého střeva; T1 M2 označuje první chirurgický časový bod, in vitro model 2)
Aplikace
Výzkum CRC; adenokarcinom tlustého střeva a konečníku; biobanka HROC Linnebacher; citlivost na léky; biologie nádoru; integrace PDX a in vitro

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Muž
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Stav GMO
Bez GMO
Podrobnosti o statusu GMO
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line (HROC Linnebacher biobank).
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Epitelu podobné
Typ buňky
Epitelové buňky

04Identifikátory

Citace
HROC222 T1 M2 (katalogové číslo Cytion 300859)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_VQ93

05Manipulace a chov

Pěstovací médium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukózy, w: 2,5 mM L-Glutaminu, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM pyruvátu sodného, w: 1,2 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820400a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10% FBS
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Obnova tekutin
Každých 3 až 5 dní
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

07Dárce

Věk dárce
79 let
Etnická příslušnost
Kavkazský