Ga naar de inhoud
CERV-196
Weefsel
Baarmoederhals
Ziekte
Plaveiselcelcarcinoom
Synoniemen
Cerv-196, MRI-H-196, MRI-H196

Documenten

CERV-196

Cell line · Productnummer 300291

The MRI-H196 cell line, derived from HPV16-positive cervical carcinoma, displays a unique HPV16 transcript expression profile characterized by the presenc...

€800.00excl. btw en verzendkosten
Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De MRI-H196 cellijn, afgeleid van HPV16-positief cervixcarcinoom, vertoont een uniek HPV16 transcript expressieprofiel dat gekenmerkt wordt door de aanwezigheid van het volledige L1 transcript en een duidelijke afwezigheid van het volledige E5 RNA. Dit patroon suggereert een integratie van het HPV16-genoom in de cellijn, waarbij met name de E2-regio is aangetast en herschikking van de L1 DNA-sequentie is veroorzaakt. De afwezigheid van expressie van E5 volledig RNA duidt op een verstoring in de transcriptie van volledige vroege RNA's, die gewoonlijk eindigen bij het polyadenyleringssignaal stroomafwaarts van het E5 open reading frame (ORF). Een dergelijke verstoring is indicatief voor de geïntegreerde toestand van HPV16-genomen, waarbij de cruciale E2-regio - de sleutel voor virale replicatie en transcriptieregulatie - vaak aangetast wordt tijdens de integratie in het gastheergenoom. Deze verstoring heeft mogelijk invloed op de expressie van downstream genen, waaronder E5.

Dit integratiefenomeen in MRI-H196 cellen benadrukt de complexiteit van het gedrag van het HPV16 genoom na integratie en benadrukt het nut van de cellijn voor het bestuderen van de genomische en transcriptionele fijne kneepjes die geassocieerd worden met HPV integratie in baarmoederhalskanker. Inzicht in deze dynamiek is cruciaal voor inzichten in de mechanismen van oncogenese en de progressie van HPV-geassocieerde kankers, waardoor de MRI-H196 cellijn een waardevolle bron is voor medisch en biologisch onderzoek.

Weefsel
Baarmoederhals
Ziekte
Plaveiselcelcarcinoom
Synoniemen
  • Cerv-196
  • MRI-H-196
  • MRI-H196

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
2

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Tumorverwekkend
Ja, in naakte muizen

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
CERV-196 (Cytion catalogusnummer 300291)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_5721

05Expressie en vatbaarheid

Virussen
HPV-16 positief
Producten
Cytokeratine 8, 18, Vimentine

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2 wordt aanbevolen
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, de cellen op een plaat aanbrengen met een dichtheid van 5 x 104 cellen/cm2 en de cellen minstens 24 uur laten herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
49 jaar
Etnische afkomst
Afrikaans