CERV-196

A linhagem celular MRI-H196, derivada de um carcinoma cervical positivo para o HPV16, apresenta um perfil de expressão de transcritos do HPV16 único, caracterizado pela presença do transcrito L1 de comprimento total e pela ausência acentuada do RNA E5 de comprimento total. Esse padrão sugere uma integração do genoma do HPV16 na linha celular, afetando particularmente a região E2 e causando um rearranjo da sequência de DNA do L1. A ausência de expressão do RNA de comprimento total do E5 indica uma interrupção na transcrição dos RNAs precoces de comprimento total, que normalmente terminam no sinal de poliadenilação localizado a jusante do quadro de leitura aberto (ORF) do E5. Tal interrupção é indicativa do estado integrado dos genomas do HPV16, em que a região E2 — crucial para a replicação viral e a regulação da transcrição — é frequentemente comprometida durante a integração no genoma do hospedeiro. Essa interrupção pode afetar a expressão de genes a jusante, incluindo o E5.

Esse fenômeno de integração nas células MRI-H196 destaca a complexidade do comportamento do genoma do HPV16 pós-integração, enfatizando a utilidade da linhagem celular no estudo das complexidades genômicas e transcricionais associadas à integração do HPV em carcinomas cervicais. Compreender essas dinâmicas é crucial para obter insights sobre os mecanismos de oncogênese e a progressão dos cânceres associados ao HPV, tornando a linhagem celular MRI-H196 um recurso valioso para pesquisas médicas e biológicas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.