RAG

La línea celular RAG es un mutante no revertible resistente a la 8-azaguanina, derivado de un adenocarcinoma renal de ratones BALB/c. Esta línea se desarrolló mediante pases alternados de animales a cultivos de tejidos para enriquecer la población tumorigénica y, al mismo tiempo, eliminar los fibroblastos estromales normales. Las células RAG presentan una morfología que varía de ameboide a epitelioide, con procesos citoplasmáticos prominentes, y son resistentes a los métodos de selección dependientes de la hipoxantina-guanina fosforibosiltransferasa (HGPRT) debido a su deficiencia enzimática. Esta resistencia ha facilitado su uso en sistemas de selección bioquímica para experimentos de hibridación de células somáticas.

Las células RAG se utilizan ampliamente como línea parental en estudios de fusión de células somáticas debido a su compatibilidad con los procedimientos de fusión que emplean el virus Sendai inactivado. Cuando se fusionan con otras líneas celulares, como LM(TK-) o WI-38, los híbridos conservan los cromosomas marcadores y muestran complementación bioquímica de las deficiencias metabólicas. Estos híbridos han sido fundamentales para mapear elementos reguladores genéticos y estudiar la expresión génica, particularmente en enzimas asociadas al riñón como la esterasa ES-2. Los híbridos RAG brindan información sobre la segregación cromosómica tanto interespecífica como intraespecífica y sobre la genómica funcional.

Además de su papel en los estudios de hibridación, las células RAG han servido como modelo para estudiar la regulación epigenética de la expresión génica. Las células híbridas que involucran a RAG a menudo muestran la extinción y la reexpresión de rasgos genéticos específicos, dependiendo de la retención o la pérdida de cromosomas particulares. Esto convierte a la línea celular RAG en una herramienta valiosa para comprender la dinámica de la regulación genética y la estabilidad cromosómica en células tumorigénicas.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.