İçeriğe atla
RAG
Doku
Böbrek
Hastalık
Fare böbrek karsinomu
Eş anlamlılar
Rag

RAG

Cell line · Ürün numarası 305190

The RAG cell line is a nonreverting 8-azaguanine-resistant mutant derived from a renal adenocarcinoma of BALB/c mice. This line was developed through alte...

€430.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
1

01Genel bilgiler

Açıklama

RAG hücre hattı, BALB/c farelerinin renal adenokarsinomundan türetilen, geri dönüşümsüz 8-azaguanine dirençli bir mutanttır. Bu hat, normal stromal fibroblastları elimine ederken tümörijenik popülasyonu zenginleştirmek için alternatif hayvan-doku kültürü pasajları yoluyla geliştirilmiştir. RAG hücreleri belirgin sitoplazmik süreçlere sahip ameboid ila epiteloid morfoloji gösterir ve enzimatik eksiklikleri nedeniyle hipoksantin-guanin fosforibosiltransferaz (HGPRT) bağımlı seçim yöntemlerine dirençlidir. Bu direnç, somatik hücre hibridizasyon deneyleri için biyokimyasal seçim sistemlerinde kullanımlarını kolaylaştırmıştır.

RAG hücreleri, inaktive Sendai virüsü kullanılan füzyon prosedürlerine uygunlukları nedeniyle somatik hücre füzyon çalışmalarında ebeveyn hattı olarak yaygın şekilde kullanılmaktadır. LM(TK-) veya WI-38 gibi diğer hücre hatlarıyla kaynaştırıldığında, hibritler işaret kromozomlarını korur ve metabolik eksikliklerin biyokimyasal tamamlayıcılığını sergiler. Bu melezler, genetik düzenleyici unsurların haritalanmasında ve özellikle ES-2 esteraz gibi böbrekle ilişkili enzimlerde gen ifadesinin incelenmesinde etkili olmuştur. RAG hibritleri hem türler arası hem de tür içi kromozomal ayrışma ve fonksiyonel genomik hakkında bilgi sağlar.

Hibridizasyon çalışmalarındaki rollerine ek olarak, RAG hücreleri gen ifadesinin epigenetik düzenlemesini incelemek için bir model olarak hizmet etmiştir. RAG içeren hibrit hücreler, belirli kromozomların tutulmasına veya kaybına bağlı olarak, genellikle belirli genetik özelliklerin yok olduğunu ve yeniden ifade edildiğini gösterir. Bu da RAG hücre hattını, tümörijenik hücrelerde genetik düzenleme ve kromozomal stabilite dinamiklerinin anlaşılmasında değerli bir araç haline getirmektedir.

Doku
Böbrek
Hastalık
Fare böbrek karsinomu
Eş anlamlılar
  • Rag

02Sınıflandırma

Canlı
Fare
Büyüme özellikleri
Bağlı
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Amoeboid

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
RAG (Cytion katalog numarası 305190)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
10090
Cellosaurus
CVCL_3575

05İfade ve duyarlılık

Protein ekspresyonu
Böbreğe özgü esteraz-2 (ES-2)

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion makale numarası 820100a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ve %1 NEAA ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Sıvı değişimi
haftada 2 ila 3 kez
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Tür / alt tür
BALB/c