RAG

A linha celular RAG é um mutante resistente à 8-azaguanina, não reversível, derivado de um adenocarcinoma renal de ratinhos BALB/c. Esta linha foi desenvolvida através de passagens alternadas de animais para culturas de tecidos para enriquecer a população tumorigénica e eliminar os fibroblastos estromais normais. As células RAG apresentam uma morfologia ameboide a epitelioide com processos citoplasmáticos proeminentes e são resistentes aos métodos de seleção dependentes da hipoxantina-guanina fosforibosiltransferase (HGPRT) devido à sua deficiência enzimática. Esta resistência facilitou a sua utilização em sistemas de seleção bioquímica para experiências de hibridação de células somáticas.

As células RAG são amplamente utilizadas como linha parental em estudos de fusão de células somáticas devido à sua compatibilidade com procedimentos de fusão que utilizam o vírus Sendai inactivado. Quando fundidas com outras linhas celulares, como a LM(TK-) ou a WI-38, os híbridos retêm cromossomas marcadores e apresentam uma complementação bioquímica das deficiências metabólicas. Estes híbridos têm sido fundamentais para o mapeamento de elementos reguladores genéticos e para o estudo da expressão génica, nomeadamente de enzimas associadas aos rins, como a ES-2 esterase. Os híbridos RAG fornecem informações sobre a segregação cromossómica inter e intra-específica e a genómica funcional.

Para além do seu papel nos estudos de hibridação, as células RAG têm servido de modelo para estudar a regulação epigenética da expressão genética. As células híbridas que envolvem RAG mostram frequentemente a extinção e a reexpressão de caraterísticas genéticas específicas, dependendo da retenção ou perda de determinados cromossomas. Isto faz da linha celular RAG uma ferramenta valiosa para compreender a dinâmica da regulação genética e a estabilidade cromossómica em células tumorigénicas.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia