RAG

A linhagem celular RAG é um mutante não reversível resistente à 8-azaguanina, derivado de um adenocarcinoma renal de camundongos BALB/c. Essa linhagem foi desenvolvida por meio de passagens alternadas de animais para cultura de tecidos, a fim de enriquecer a população tumorigênica e, ao mesmo tempo, eliminar os fibroblastos estromais normais. As células RAG apresentam uma morfologia amebóide a epitelóide, com processos citoplasmáticos proeminentes, e são resistentes a métodos de seleção dependentes da hipoxantina-guanina fosforibosiltransferase (HGPRT) devido à sua deficiência enzimática. Essa resistência facilitou seu uso em sistemas de seleção bioquímica para experimentos de hibridização de células somáticas.

As células RAG são amplamente utilizadas como linha parental em estudos de fusão de células somáticas devido à sua compatibilidade com procedimentos de fusão que utilizam o vírus Sendai inativado. Quando fundidas com outras linhagens celulares, como LM(TK-) ou WI-38, os híbridos retêm cromossomos marcadores e exibem complementação bioquímica de deficiências metabólicas. Esses híbridos têm sido fundamentais no mapeamento de elementos reguladores genéticos e no estudo da expressão gênica, particularmente em enzimas associadas ao rim, como a esterase ES-2. Os híbridos RAG fornecem insights tanto sobre a segregação cromossômica inter e intraespecífica quanto sobre a genômica funcional.

Além de seu papel em estudos de hibridização, as células RAG têm servido como modelo para estudar a regulação epigenética da expressão gênica. Células híbridas envolvendo RAG frequentemente apresentam extinção e reexpressão de características genéticas específicas, dependendo da retenção ou perda de determinados cromossomos. Isso torna a linhagem celular RAG uma ferramenta valiosa para compreender a dinâmica da regulação genética e da estabilidade cromossômica em células tumorigênicas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.