RAG

La lignée cellulaire RAG est un mutant non réversible résistant à l’8-azaguanine, dérivé d’un adénocarcinome rénal de souris BALB/c. Cette lignée a été développée par des passages alternés entre culture animale et culture tissulaire afin d’enrichir la population tumorigène tout en éliminant les fibroblastes stromaux normaux. Les cellules RAG présentent une morphologie amiboïde à épithélioïde avec des prolongements cytoplasmiques proéminents et sont résistantes aux méthodes de sélection dépendantes de l’hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransférase (HGPRT) en raison de leur déficit enzymatique. Cette résistance a facilité leur utilisation dans les systèmes de sélection biochimiques pour les expériences d’hybridation de cellules somatiques.

Les cellules RAG sont largement utilisées comme lignée parentale dans les études de fusion de cellules somatiques en raison de leur compatibilité avec les procédures de fusion utilisant le virus Sendai inactivé. Lorsqu’elles sont fusionnées avec d’autres lignées cellulaires, telles que LM(TK-) ou WI-38, les hybrides conservent des chromosomes marqueurs et présentent une complémentation biochimique des déficiences métaboliques. Ces hybrides ont joué un rôle déterminant dans la cartographie des éléments régulateurs génétiques et l’étude de l’expression génique, en particulier chez les enzymes associées aux reins comme l’estérase ES-2. Les hybrides RAG fournissent des informations sur la ségrégation chromosomique tant inter- qu’intraspécifique ainsi que sur la génomique fonctionnelle.

En plus de leur rôle dans les études d’hybridation, les cellules RAG ont servi de modèle pour étudier la régulation épigénétique de l’expression génique. Les cellules hybrides impliquant des RAG présentent souvent la disparition puis la réapparition de traits génétiques spécifiques, selon la conservation ou la perte de certains chromosomes. Cela fait de la lignée cellulaire RAG un outil précieux pour comprendre la dynamique de la régulation génétique et la stabilité chromosomique dans les cellules tumorigènes.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.