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- Tissue
- Testicule
- Disease
- Cellules de Leydig testiculaires normales (non tumorigènes; souris BALB/c)
- Metastatic site
- Sans objet (lignée cellulaire testiculaire normale, non tumorigène)
- Synonyms
- TM-3
Documents
TM3
Cell line · Product number 305167
TM3 Cells are a unique cell line derived from 11 to 13-day-old male mouse Leydig cells, exhibiting adherent growth properties. These cells are non-tumorigeni...
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01General information
- Description
- Les cellules TM3 constituent une lignée cellulaire unique dérivée de cellules de Leydig de souris mâles âgées de 11 à 13 jours, présentant des propriétés de croissance adhérente. Ces cellules sont non tumorigènes, car elles ne provoquent pas de tumeurs chez les souris immunodéprimées, bien qu’elles puissent former des colonies dans un milieu semi-solide. Elles expriment le gène de la prostaglandine F2a et se caractérisent par plusieurs marqueurs d’expression, notamment l’hormone lutéinisante (LH), le facteur de croissance épidermique (EGF) et des marqueurs positifs pour les récepteurs des androgènes, des œstrogènes et de la progestérone. Une caractéristique notable des cellules TM3 est leur réponse à la LH, qui entraîne une augmentation de la production d’AMPc; toutefois, elles ne réagissent pas à l’hormone folliculo-stimulante (FSH). Le maintien de la réactivité à la LH dépend du lot de sérum utilisé. De plus, en présence de LH, ces cellules sont capables de métaboliser le cholestérol. Elles ont été testées et se sont révélées négatives pour le virus de l’ectromélie (variole de la souris), ce qui garantit un niveau élevé de sécurité pour une utilisation en laboratoire.
- Tissue
- Testicule
- Disease
- Cellules de Leydig testiculaires normales (non tumorigènes; souris BALB/c)
- Metastatic site
- Sans objet (lignée cellulaire testiculaire normale, non tumorigène)
- Applications
- Biologie des cellules de Leydig; stéroïdogenèse testiculaire; voie de signalisation LH/AMPc; études sur les récepteurs des androgènes, des œstrogènes et de la progestérone; réactivité aux gonadotrophines; métabolisme du cholestérol; recherche sur le développement et le fonctionnement des testicules
- Synonyms
- TM-3
02Classification
- Organism
- Mouse
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- Non-GMO
- GMO status details
- No genetic modification; wildtype mouse Leydig cell line derived from neonatal BALB/c testis by primary culture
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- Épithélial
- Cell type
- Cellules de Leydig
- Doubling time
- environ 36 à 48 heures
04Identifiers
- Citation
- TM3 (numéro de catalogue Cytion 305167)
- NCBI TaxID
- 10090
- Cellosaurus
- CVCL_4326
05Handling and culture
- Culture medium
- DMEM : F12 de Ham (1:1), p/v : 3,1 g/L de glucose, p/v : 2,5 mM de L-glutamine, p/v : 15 mM d’HEPES, 0,5 mM de pyruvate de sodium, 1,2 g/L de NaHCO₃ (référence Cytion 820400a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5 % de CO₂, atmosphère humidifiée.
- Supplements
- Ajouter au milieu 2,5 % de FBS et 5 % de sérum de cheval
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Retirez l’ancien milieu des cellules adhérentes et lavez-les avec du PBS sans calcium ni magnésium. Pour les flacons T25, utilisez 3 à 5 ml de PBS, et pour les flacons T75, utilisez 5 à 10 ml. Ensuite, recouvrez complètement les cellules d’Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laissez les cellules incuber à température ambiante pendant 8 à 10 minutes afin de les détacher. Après l’incubation, mélangez délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifugez à 300 x g pendant 3 minutes. Éliminez le surnageant, remettez les cellules en suspension dans du milieu frais, puis transférez-les dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
- Split ratio
- 1 à 3
- Seeding density
- de 1 à 3 × 10⁴ cellules/cm²
- Fluid renewal
- 2 à 3 fois par semaine
- Post-thaw recovery
- Après décongélation, ensemencer les cellules à raison de 5 × 10⁴ cellules/cm² et laisser au moins 24 à 48 heures pour l'adhérence avant le premier changement de milieu. Maintenir la réactivité à la LH, qui dépend du lot de sérum, en validant chaque lot de FBS quant à sa réponse de l'AMPc à la LH.
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
06Quality control and cryopreservation
- Sterility
La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.
Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.
- Freeze medium
- Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (contenant du sérum fœtal bovin) + 10 % de DMSO pour assurer une viabilité adéquate après décongélation, ou du CM-1 (référence Cytion 800100), qui contient des osmoprotecteurs et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryoconservation.
- Storage conditions
Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.
- Shipping conditions
Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.
07Donor
- Breed / subspecies
- BALB/c
- Donor age
- de 11 à 13 jours
08Legal and safety
- Safety precautions
- Lorsqu’on prévoit entreposer un cryotube dans de l’azote liquide en vue d’une décongélation ultérieure, il est impératif de respecter des mesures de sécurité rigoureuses. Le port de gants et de vêtements de protection appropriés est essentiel, et l’utilisation d’un masque facial ou de lunettes de protection est obligatoire lors du transfert d’échantillons congelés vers ou depuis le réservoir d’azote liquide. Cette précaution vise à réduire le risque de blessure causé par d’éventuelles explosions de cryotubes lors de leur retrait, pouvant entraîner la projection de fragments coupants.
- Warranty
Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.
Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.
- Material Transfer Agreement required
- Yes
