Přejít na obsah
TM3
Tkáň
Testis
Nemoc
Normální Leydigovy buňky varlat (netumorogenní; myš BALB/c)
Místo metastázy
Nevztahuje se (normální, netumorogenní testikulární buněčná linie)
Synonyma
TM-3

Dokumenty

TM3

Cell line · Číslo výrobku 305167

TM3 Cells are a unique cell line derived from 11 to 13-day-old male mouse Leydig cells, exhibiting adherent growth properties. These cells are non-tumorigeni...

€430.00bez DPH a poštovného
Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
  • CoA
1

01Obecné informace

Popis
Buňky TM3 jsou jedinečnou buněčnou linií odvozenou z 11 až 13 dní starých samčích Leydigových buněk myší, která vykazuje adherentní růstové vlastnosti. Tyto buňky nejsou nádorové, protože u imunosuprimovaných myší nezpůsobují nádory, ačkoli mohou vytvářet kolonie v polotuhém médiu. Exprimují gen pro prostaglandin F2a a vyznačují se několika expresními markery včetně luteinizačního hormonu (LH), epidermálního růstového faktoru (EGF) a pozitivních markerů pro androgenní, estrogenní a progesteronové receptory. Pozoruhodným rysem buněk TM3 je jejich reakce na LH, která vede ke zvýšení produkce cAMP; nereagují však na folikuly stimulující hormon (FSH). Udržení reaktivity na LH je závislé na množství séra. Kromě toho mohou tyto buňky v přítomnosti LH metabolizovat cholesterol. Byly testovány a shledány negativními na virus ektromelie (myší neštovice), což zajišťuje vysoký standard bezpečnosti pro laboratorní použití
Tkáň
Testis
Nemoc
Normální Leydigovy buňky varlat (netumorogenní; myš BALB/c)
Místo metastázy
Nevztahuje se (normální, netumorogenní testikulární buněčná linie)
Aplikace
Biologie Leydigových buněk; steroidogeneze ve varlatech; signální dráha LH/cAMP; výzkum receptorů pro androgeny, estrogeny a progesteron; citlivost na gonadotropiny; metabolismus cholesterolu; výzkum vývoje a funkce varlat
Synonyma
  • TM-3

02Klasifikace

Organismus
Myš
Sex
Muž
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Stav GMO
Bez GMO
Podrobnosti o statusu GMO
No genetic modification; wildtype mouse Leydig cell line derived from neonatal BALB/c testis by primary culture
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Epitelové
Typ buňky
Leydigovy buňky
Doba zdvojnásobení
přibližně 36 až 48 hodin

04Identifikátory

Citace
TM3 (katalogové číslo Cytion 305167)
Daňové identifikační číslo NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_4326

05Manipulace a chov

Pěstovací médium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukózy, w: 2,5 mM L-Glutaminu, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM pyruvátu sodného, w: 1,2 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820400a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 2,5 % FBS, 5 % koňského séra
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Poměr rozdělení
1 až 3
Hustota výsevu
1 až 3 × 10⁴ buněk/cm²
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Zotavení po rozmrazení
Po rozmrazení naneste buňky na kultivační misky v hustotě 5 × 10⁴ buněk/cm² a před první výměnou média počkejte alespoň 24–48 hodin, aby se buňky přichytily. Udržujte citlivost na LH v závislosti na šarži séra tím, že u každé šarže FBS ověříte reakci cAMP na LH.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

07Dárce

Plemeno / poddruh
BALB/c
Věk dárce
11 až 13 dní

Možná budete také potřebovat