Skip to content
GP2D
Tissue
קולון
Disease
אדנוקרצינומה
Synonyms
Gp2d, Gp2D, GP2D

Documents

GP2D

Cell line · Product number 305778

GP2d is a human colorectal adenocarcinoma cell line derived from a poorly differentiated colon tumor. It was established alongside a sister line, GPSd, fr...

US$800.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

GP2d הוא קו תאים של אדנוקרצינומה של המעי הגס האנושי, שמקורו בגידול במעי הגס בעל דיפרנציאציה נמוכה. הוא הוקם במקביל לקו אחות, GPSd, מאותה דגימת אדנוקרצינומה. אף ששני הקווים חולקים שינויים גנטיים דומים התואמים לדפוסים נפוצים הנצפים בסרטן המעי הגס, כולל כפל הפוך באזור כרומוזום 10q11-q21, הם נבדלים זה מזה באופן בולט במאפיינים הפנוטיפיים ובהתנהגות התאית שלהם. יש לציין כי לא זוהו טרנסלוקציות הקשורות לפרוטו-אונקוגן ret – הממופה לאזור כרומוזומלי זה – באמצעות ניתוח Southern blot, מה שמרמז כי הכפילות לא שיבשה את הגן הזה באופן ישיר.

תאי GP2d מפגינים דפוס צמיחה מלוכד ומתפשט מקצות המיקרו-מושבות ליצירת שכבה אפיתלית חד-תאית מתמזגת. מורפולוגיה זו מלווה בדפוסי ביטוי מובחנים של מולקולות הדבקה כגון α2-אינטגרין, דסמופלאקין ו-E-קדרין, שכולן ממלאות תפקידים בשמירה על שלמות האפיתל. מבחינה תפקודית, תאי GP2d מגיבים בעוצמה לגורם גדילה אפידרמי (EGF), לגורם גדילה טרנספורמטיבי-אלפא (TGFα) ולאינסולין, כפי שהודגם על ידי ריבוי תאים מוגבר בתגובה לליגנדים אלה. מעניין לציין כי הן GP2d והן GPSd מבטאים מספר דומה של קולטני EGF, אך נבדלים בביטוי הליגנדים של קולטני EGF. בתאי GP2d יש שפע של mRNA של אמפירגולין, בעוד ש-GPSd מבטא בעיקר mRNA של TGFα עם מעט אמפירגולין או ללא אמפירגולין כלל, דבר המתאים לתגובות הביולוגיות השונות שנצפו.

תכונות אלה הופכות את GP2d למודל חשוב לחקר הוויסות של איתות גורמי הגדילה וההידבקות התאית בסרטן המעי הגס. תגובתו לגירויים במסלול ה-EGF והמורפולוגיה האפיתלית הייחודית שלו מדגישים את התועלת שלו בחקר התמיינות והתפשטות תאי הגידול. יתר על כן, המקור המשותף עם GPSd מאפשר מחקרים השוואתיים של וריאציות קלונליות בתוך הגידולים, במיוחד בהקשר של דינמיקת הליגנד-קולטן ותגובות המעבר האפיתלי-למזנכימלי (EMT).

Tissue
קולון
Disease
אדנוקרצינומה
Synonyms
  • Gp2d
  • Gp2D
  • GP2D

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Identifiers

Citation
GP2D (מספר קטלוגי של Cytion: 305778)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_2450

04Expression and susceptibility

Mutational profile
מוטציה: KRAS, פשוטה, p.Gly12Asp (c.35G>A), הטרוזיגוטית, TP53

05Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

07Donor

Donor age
71 שנים
Ethnicity
קווקזי