GP2D

A GP2d é uma linhagem celular de adenocarcinoma colorretal humano derivada de um tumor de cólon pouco diferenciado. Ela foi estabelecida juntamente com uma linhagem irmã, a GPSd, a partir da mesma amostra de adenocarcinoma. Embora ambas as linhagens compartilhem alterações genéticas semelhantes, consistentes com padrões comuns observados no câncer colorretal — incluindo uma duplicação invertida envolvendo o cromossomo 10q11-q21 —, elas diferem marcadamente em suas características fenotípicas e comportamento celular. Notavelmente, nenhuma translocação envolvendo o proto-oncogene ret — mapeado para essa região cromossômica — foi detectada pela análise de Southern blot, sugerindo que a duplicação não afetou diretamente esse gene.

As células GP2d exibem um padrão de crescimento coeso e espalhado a partir das bordas das microcolônias, formando uma monocamada epitelial confluente. Essa morfologia é acompanhada por padrões distintos de expressão de moléculas de adesão, como a integrina α2, a desmoplaquina e a E-caderina, todas as quais desempenham papéis na manutenção da integridade epitelial. Funcionalmente, as células GP2d respondem de forma robusta ao fator de crescimento epidérmico (EGF), ao fator de crescimento transformador alfa (TGFα) e à insulina, conforme demonstrado pelo aumento da proliferação celular em resposta a esses ligantes. Curiosamente, tanto as células GP2d quanto as GPSd expressam números comparáveis de receptores de EGF, mas diferem na expressão de ligantes desses receptores. As células GP2d apresentam mRNA abundante de anfiregulina, enquanto as GPSd expressam predominantemente mRNA de TGFα, com pouca ou nenhuma anfiregulina, o que se correlaciona com as diferentes respostas biológicas observadas.

Essas características tornam a GP2d um modelo valioso para o estudo da regulação da sinalização de fatores de crescimento e da adesão celular no câncer colorretal. Sua capacidade de resposta aos estímulos da via do EGF e sua morfologia epitelial distinta destacam sua utilidade na investigação da diferenciação e proliferação de células tumorais. Além disso, a origem comum com as células GPSd permite estudos comparativos da variação clonal dentro dos tumores, particularmente no contexto da dinâmica ligante-receptor e das respostas à transição epitelial-mesenquimal (EMT).

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.