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T84
Cell line · Product number 300354
This line exhibits tight junctions, and desmosomes between adjacent cells. The cells should be maintained at high density (at least 1/4 confluency).
Recommended (freshest lot)
01General information
- Description
- Essa linhagem apresenta junções apertadas e desmossomos entre células adjacentes. As células devem ser mantidas em alta densidade (pelo menos 1/4 de confluência).
- Tissue
- Dois pontos
- Disease
- Carcinoma
- Metastatic site
- Pulmão
- Applications
- Pesquisa sobre câncer colorretal; biologia do epitélio intestinal; estudos sobre junções estreitas e função de barreira; fisiologia do transporte colônico; pesquisa sobre o regulador de condutância transmembranar da fibrose cística (CFTR); absorção e metabolismo de medicamentos; modelos de xenoenxertos
- Synonyms
- T-84
- T 84
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- Non-GMO
- GMO status details
- No genetic modification; wildtype colon carcinoma cell line (KRAS G13D heterozygous mutation is an endogenous somatic change, not a genetic engineering modification)
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De tipo epitelial
- Cell type
- Células epiteliais
- Tumourigenic
- Sim, em camundongos nude
- Karyotype
- O número modal de cromossomos da linhagem-tronco é 56, ocorrendo em 28%, com poliploidia em 12,4%. Dezoito marcadores são comuns à maioria das metáfases examinadas. O cromossomo X normal e o cromossomo 13 estavam ausentes; os cromossomos 2, 4 e 22 apresentavam uma única cópia; e o cromossomo 12 apresentava quatro cópias. Nenhum cromossomo Y foi detectado pela observação de bandas Q. A DM ocorreu em quase 50% das células.
- Doubling time
- aproximadamente 48 a 72 horas
04Identifiers
- Citation
- T84 (número de catálogo da Cytion 300354)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_0555
05Expression and susceptibility
- Receptors expressed
- Hormônio peptídico, neurotransmissor
- Antigen expression
- Queratina + (coloração por imunoperoxidase)
- Isoenzymes
- G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 1, ES-D, 1, Me-2, 1-2, AK-1, 1, GLO-1, 1-2
- Mutational profile
- As células T84 apresentam uma mutação heterozigótica no Kras no códon 13: GGC (Wt Gly) > GAC (Asp)
- Products
- Antígeno carcinoembrionário (CEA), 600 ng/ml por 10 exp6 células a cada 10 dias, queratina
06Handling and culture
- Culture medium
- F12 de Ham, contendo: 1,0 mM de glutamina estável, 1,0 mM de piruvato de sódio e 1,1 g/L de NaHCO₃ (número de artigo da Cytion: 820600a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.
- Supplements
- Adicione 10% de FBS ao meio
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Remova o meio antigo das células aderentes e lave-as com PBS sem cálcio nem magnésio. Para frascos T25, use 3 a 5 ml de PBS; para frascos T75, use 5 a 10 ml. Em seguida, cubra as células completamente com Accutase, utilizando 1 a 2 ml para frascos T25 e 2,5 ml para frascos T75. Deixe as células incubarem à temperatura ambiente por 8 a 10 minutos para que se desprendam. Após a incubação, misture delicadamente as células com 10 ml de meio para ressuspender, depois centrifugue a 300xg por 3 minutos. Descarte o sobrenadante, ressuspenda as células em meio fresco e transfira-as para novos frascos que já contenham meio fresco.
- Split ratio
- 1 a 3
- Seeding density
- 1 a 2 × 10⁴ células/cm² (manter no mínimo 1/4 de confluência para preservar o fenótipo das junções apertadas)
- Fluid renewal
- 2 vezes por semana
- Post-thaw recovery
- Após o descongelamento, semeie as células a uma densidade de 5 × 10⁴ células/cm² e aguarde pelo menos 24–48 horas para que se fixem. Mantenha as células em alta densidade (≥25% de confluência) para preservar a formação de junções apertadas.
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.
Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.
- Freeze medium
- Como meio de criopreservação, utilizamos meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% de DMSO para garantir viabilidade adequada após o descongelamento, ou CM-1 (número de catálogo da Cytion 800100), que inclui osmoprotetores e estabilizadores metabólicos otimizados para melhorar a recuperação e reduzir o estresse induzido pela criopreservação.
- Storage conditions
Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.
- Shipping conditions
As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.
08Donor
- Donor age
- 72 anos
- Ethnicity
- Etnia não especificada
09Legal and safety
- Safety precautions
- Ao planejar o armazenamento de um criotubo em nitrogênio líquido para descongelamento futuro, é obrigatório seguir medidas de segurança rigorosas. É essencial o uso de luvas e roupas de proteção adequadas, além do uso obrigatório de máscara facial ou óculos de proteção durante a transferência de amostras congeladas para dentro ou para fora do tanque de nitrogênio líquido. Isso visa mitigar o risco de ferimentos decorrentes de possíveis explosões dos criotubos durante a remoção, o que pode resultar na projeção de fragmentos pontiagudos.
- Warranty
Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.
Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.
- Material Transfer Agreement required
- Yes