Přejít na obsah
T84
Tkáň
Střeva
Nemoc
Karcinom
Místo metastázy
Plíce
Synonyma
T-84, T 84

Dokumenty

T84

Cell line · Číslo výrobku 300354

This line exhibits tight junctions, and desmosomes between adjacent cells. The cells should be maintained at high density (at least 1/4 confluency).

€430.00bez DPH a poštovného
Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
  • CoA
1

01Obecné informace

Popis
Tato linie vykazuje těsné spoje a desmosomy mezi sousedními buňkami. Buňky by měly být udržovány ve vysoké hustotě (alespoň 1/4 konfluence).
Tkáň
Střeva
Nemoc
Karcinom
Místo metastázy
Plíce
Aplikace
Výzkum kolorektálního karcinomu; biologie střevního epitelu; studie těsných spojů a bariérové funkce; fyziologie transportu v tlustém střevě; výzkum regulátoru transmembránové vodivosti u cystické fibrózy (CFTR); absorpce a metabolismus léčiv; modely xenotransplantátů
Synonyma
  • T-84
  • T 84

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Muž
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Stav GMO
Bez GMO
Podrobnosti o statusu GMO
No genetic modification; wildtype colon carcinoma cell line (KRAS G13D heterozygous mutation is an endogenous somatic change, not a genetic engineering modification)
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Epitelu podobné
Typ buňky
Epitelové buňky
Tumorogenní
Ano, u nahých myší
Karyotyp
Modální počet chromozomů v kmenové linii je 56, vyskytuje se ve 28 % a polyploidie ve 12,4 %. Osmnáct markerů je společných pro většinu zkoumaných metafází. Normální chromozom x a chromozom 13 chyběly, chromozomy 2, 4 a 22 byly jednokopírové a chromozom 12 byl čtyřkopírový. pozorováním Q-pásu nebyl zjištěn žádný chromozom Y. V případě chromozomu Y byl chromozom Y zjištěn pouze v jednom případě. DM se vyskytoval téměř u 50 % buněk.
Doba zdvojnásobení
přibližně 48 až 72 hodin

04Identifikátory

Citace
T84 (katalogové číslo Cytion 300354)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0555

05Exprese a náchylnost

Exprimované receptory
Peptidový hormon, neurotransmiter
Exprese antigenu
Keratin + (barvení imunoperoxidázou)
Isoenzymy
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 1, ES-D, 1, Me-2, 1-2, AK-1, 1, GLO-1, 1-2
Mutační profil
Buňky T84 nesou heterozygotní mutaci Krasu v kodonu 13: GGC(Wt Gly) >GAC(Asp)
Produkty
Karcinoembryonální antigen (CEA), 600 ng/ml na 10 exp6 buněk za 10 dní, keratin

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
Ham's F12, w: 1,0 mM stabilní glutamin, w: 1,0 mM pyruvát sodný, w: 1,1 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820600a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10% FBS
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Poměr rozdělení
1 až 3
Hustota výsevu
1 až 2 × 10⁴ buněk/cm² (udržujte minimálně 1/4 konfluence, aby se zachoval fenotyp těsných spojů)
Obnova tekutin
2krát týdně
Zotavení po rozmrazení
Po rozmrazení naneste buňky na kultivační misku v hustotě 5 × 10⁴ buněk/cm² a nechte je přilnout po dobu nejméně 24–48 hodin. Udržujte buňky ve vysoké hustotě (≥25 % konfluence), aby se zachovala tvorba těsných spojů.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Věk dárce
72 let
Etnická příslušnost
Etnická příslušnost neuvedena