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T84
Gewebe
Doppelpunkt
Krankheit
Karzinom
Metastasenherd
Lunge
Synonyme
T-84, T 84

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T84

Cell line · Artikelnummer 300354

This line exhibits tight junctions, and desmosomes between adjacent cells. The cells should be maintained at high density (at least 1/4 confluency).

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung
Diese Linie weist enge Verbindungsstellen und Desmosomen zwischen benachbarten Zellen auf. Die Zellen sollten in hoher Dichte gehalten werden (mindestens 1/4 Konfluenz).
Gewebe
Doppelpunkt
Krankheit
Karzinom
Metastasenherd
Lunge
Anwendungen
Forschung zu Darmkrebs; Biologie des Darmepithels; Untersuchungen zu Tight Junctions und Barrierefunktionen; Transportphysiologie des Dickdarms; Forschung zum zystischen Fibrose-Transmembran-Leitfähigkeitsregulator (CFTR); Arzneimittelresorption und -metabolismus; Xenotransplantatmodelle
Synonyme
  • T-84
  • T 84

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
Ohne Gentechnik
Angaben zum GVO-Status
No genetic modification; wildtype colon carcinoma cell line (KRAS G13D heterozygous mutation is an endogenous somatic change, not a genetic engineering modification)
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Zelltyp
Epithelzellen
Tumorauslösend
Ja, in Nacktmäusen
Karyotyp
Die Modalchromosomenzahl der Stammlinie beträgt 56 und kommt zu 28 % vor, wobei die Polyploidie bei 12,4 % liegt. Achtzehn Marker sind den meisten untersuchten Metaphasen gemeinsam. Normales x und Chromosom 13 fehlten, die Chromosomen 2, 4 und 22 waren einfach kopiert, und Chromosom 12 war vierfach kopiert, und bei der Q-Band-Beobachtung wurde kein Y-Chromosom entdeckt. DM trat bei fast 50 % der Zellen auf.
Verdopplungszeit
ca. 48 bis 72 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
T84 (Cytion Katalognummer 300354)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0555

05Expression und Anfälligkeit

Exprimierte Rezeptoren
Peptidhormon, Neurotransmitter
Antigenexpression
Keratin + (Immunoperoxidase-Färbung)
Isoenzyme
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 1, ES-D, 1, Me-2, 1-2, AK-1, 1, GLO-1, 1-2
Mutationsprofil
T84-Zellen tragen eine heterozygote Kras-Mutation in Codon13: GGC(Wt Gly) >GAC(Asp)
Produkte
Carcinoembryonales Antigen (CEA), 600 ng/ml pro 10 exp6 Zellen pro 10 Tage, Keratin

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
Ham's F12, w: 1,0 mM stabiles Glutamin, w: 1,0 mM Natriumpyruvat, w: 1,1 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820600a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Split-Verhältnis
1 bis 3
Aussaatdichte
1 bis 2 × 10⁴ Zellen/cm² (mindestens 1/4 Konfluenz beibehalten, um den Phänotyp der Tight Junctions zu erhalten)
Flüssigkeitswechsel
2 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 × 10⁴ Zellen/cm² ausplattieren und mindestens 24–48 Stunden für die Adhäsion einplanen. Die Zellen bei hoher Dichte (≥25 % Konfluenz) halten, um die Bildung von Tight Junctions zu gewährleisten.
Auftauen und Kultivierung

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
72 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Ethnische Zugehörigkeit nicht angegeben