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01General information
- Description
AML12 细胞又称阿尔法小鼠肝 12 细胞，是一种非肿瘤性上皮细胞系，来源于转基因小鼠的肝脏。开发这些细胞的初衷是为研究成年小鼠的肝细胞功能和肝脏生物学提供一个合适的体外模型。AML12 细胞表达分化肝细胞的典型特征，包括产生白蛋白、转铁蛋白和其他肝脏特异性蛋白，使其成为研究毒理学、药物代谢和肝脏疾病的宝贵资源。
该细胞系是在小鼠金属硫蛋白-I启动子的控制下，从携带人类转化生长因子α（TGF-α）转基因的小鼠体内分离出的肝细胞建立的。这种基因改变有助于细胞的永生化，而不会破坏其分化状态。AML12 细胞在标准细胞培养条件下能保持稳定的表型和核型，其中包括对生长培养基中地塞米松和胰岛素-转铁蛋白-硒的独特需求，以促进增殖和维持肝细胞特异性功能。
- Tissue
- 肝脏
- Applications
- 三维细胞培养、高通量筛选、毒理学
- Synonyms
- AML-12
- AML 12
- Alpha Mouse Liver 12
02Classification
- Organism
- Mouse
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This murine hepatocyte cell line (AML12) contains a human TGF-α transgene introduced by transfection, enabling growth-factor-dependent signaling studies. The insert is stably integrated into hepatocytic cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 上皮细胞
- Cell type
- 肝细胞
04Identifiers
- Citation
- AML12（Cytion 目录号 300643）
- NCBI TaxID
- 10090
- Cellosaurus
- CVCL_0140
05Expression and susceptibility
- Products
- 这些细胞表达高水平的人类 TGF alpha 和较低水平的小鼠 TGF alpha。
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM:Ham's F12（1:1），w: 3.1 g/L 葡萄糖，w: 2.5 mM L-谷氨酰胺，w: 15 mM HEPES，w: 0.5 mM 丙酮酸钠，w: 1.2 g/L NaHCO3（Cytion 文章编号 820400a）。
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, 加湿环境。
- Supplements
- 在培养基中添加 10% FBS、10 微克/毫升胰岛素、5.5 微克/毫升转铁蛋白、5 纳克/毫升硒、40 纳克/毫升地塞米松
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 去除粘附细胞上的旧培养基，用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS，T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞，T25 烧瓶用 1-2 毫升，T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟，使其分离。孵育后，用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬，然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。
为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。
- Freeze medium
- 我们使用完全生长培养基（包括 FBS）+10% DMSO 或 CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）作为冷冻保存培养基，以获得足够的解冻后存活率，CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂，可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。
- Storage conditions
如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。
- Shipping conditions
冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
08Donor
- Breed / subspecies
- CD-1 MT42 转基因
- Donor age
- 3 个月
09Legal and safety
- Safety precautions
- 计划将低温样品储存在液氮中以便将来解冻时，必须遵守严格的安全措施。在将冷冻样本移入或移出液氮罐时，必须穿戴适当的防护手套和防护服，并使用面罩或安全护目镜。这样做是为了降低在移出时因冷冻样品爆炸而造成伤害的风险，因为爆炸可能导致锋利的碎片飞溅。
- Warranty
在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。
有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。
- Material Transfer Agreement required
- Yes